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落木778

铜虫 (小有名气)

[求助] Millipore超滤离心管浓缩纯化后的蛋白质 已有4人参与

请教各位大神,我的目的蛋白是携带GST标签的,分子量大约40KDa,使用Millipore超滤离心管浓缩,规格4ml , 10KDa;4℃,4000rpm,10min离心后约摸剩下200ul浓缩后的蛋白,然后进行BCA浓度测定,发现浓缩后的蛋白的浓度比将废弃的液体的蛋白浓度还要低,迷惑了,请求分析与帮助!!!
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wallflowere

新虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by pursuream at 2016-05-06 01:04:06
你的4000rpm对应多少g?初始体积有多少?转速似乎有些高。我一般用到3000 rpm, 约2000 g。你可以试试超滤荧光蛋白,看下面有无荧光。
...

他的转速是正常的,应该是滤膜漏了,每次的滤液都要留着,做个bca或者直接考玛斯染色,看看有没有蛋白漏出就可以了啊!漏了就换个新的重新来一次

发自小木虫Android客户端
12楼2016-05-06 23:17:32
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aoda123

木虫 (正式写手)

是不是转速大,离心管的滤膜破了?

发自小木虫Android客户端
身体健康,工作顺利
2楼2016-05-02 22:26:44
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moychan

银虫 (小有名气)

换一种方法吧,这种方法本身就有很大的损失

发自小木虫Android客户端
3楼2016-05-02 22:47:01
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虫虫笑了

木虫 (小有名气)

是不是小于目的蛋白的杂蛋白量很大呢,一旦过滤之后,大部分的杂蛋白被分离出去,剩下的蛋白虽然体积小了,但是浓度也不会很高
1111
4楼2016-05-03 09:15:32
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