应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 半定量
51/1返回列表
查看: 1279  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zfy535251

新虫 (小有名气)

[求助] 半定量 已有1人参与

半定量和RT-半定量有什么区别？半定量是用cDNA用平时普通的pcr仪扩增么？一般程序是什么？还需要用SYBR吗？师兄师姐帮我，问题好多

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-04-22 18:48:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by zfy535251 at 2016-04-22 19:44:18
还有pcr程序一般是什么呢？
...

就是正常普通PCR的程序呀。
赞一下 回复此楼
6楼2016-04-22 19:46:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
半定量是一种检测基因的表达量的方法，通常设置两个在PCR指数增长期的循环数，以内参基因在低循环的亮度作为参考，通过比较低循环和高循环的目的基因的条带亮度差异来表征基因的表达情况。
半定量所用也应该是cDNA作为模板，用普通R-Taq酶就可以。
一般步骤：提RNA---反转录成cDNA--内参基因设置循环26左右去调整反转录的cDNA的条带亮度一致（跑电泳）--亮度一致后，一般设置26和28/29循环，其中26循环有内参和目的基因，28循环只有目的基因---PCR结束统一电泳---灰度比较表达量。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2016-04-22 19:35:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zfy535251

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-22 19:35:31
半定量是一种检测基因的表达量的方法，通常设置两个在PCR指数增长期的循环数，以内参基因在低循环的亮度作为参考，通过比较低循环和高循环的目的基因的条带亮度差异来表征基因的表达情况。
半定量所用也应该是cDNA ...

为什么要设3个不同的循环呢？目的基因和内参的循环数不应该一样吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-04-22 19:40:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zfy535251

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zfy535251 at 2016-04-22 19:40:17
为什么要设3个不同的循环呢？目的基因和内参的循环数不应该一样吗？
...

还有pcr程序一般是什么呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-04-22 19:44:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭