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半仙0356

新虫 (正式写手)

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[交流] 自己设计的引物，PCR后出现多条带～

自己设计的引物，PCR后电泳出现多条带，引物回来的时候上面标的退火温度不准，怎么破？？？求大神～

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1楼 2016-04-22 16:40:35

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heygod1212

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 8229612

★
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引用回帖:

13楼: Originally posted by jingyu90217 at 2016-04-23 00:56:02
引物设计的如果没问题（二级结构,GC含量，引物间配对等），就是评论里大家说的要摸Tm梯度。引物合成单回来的上下游温度之和除2减5。然后以这个温度为中间值。上下各隔2度试下。
...

我设计了引物，引物的Tm值都是40多一点，50不到，然后△Gm是-20多，将近30怎么办