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19911025zy

银虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌高密度发酵求教 已有3人参与

一般大肠杆菌高密度上罐后的发酵周期是多久啊?我得每隔一两个小时测残糖,是不是还得熬通宵啊?求大神指导
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jiuzi59

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zywys2009 at 2016-05-13 15:30:59
发酵一般都是一个小团队的活,大肠杆菌已经是发酵时间很短的菌种了...

一个人要做分子改造,还要做发酵,哪能发酵熬夜呢?不过发酵还做的可以。以前还测下残糖,现在根本都不用仪器测了,其实很简单,缺糖的时候DO、pH回升,这时候需要补糖。大肠杆菌一般耗糖补糖最高在1%/h(w/w),从补糖开始就线性增加到1%/h,后期一直是这个的补糖速率,OD可以轻松达到100的。这是我的经验,现在我只在补糖的时候看看,后面就不管了。你可以试试看,做到这样,其实发酵不累的。
9楼2016-05-23 21:07:09
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jiuzi59

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by zywys2009 at 2016-05-24 09:45:37
看来你的发酵工艺很成熟了,挺羡慕的。
我们主要做可溶性和胞外表达,有的品种还涉及到抗生素禁止使用的情况,所以操作时需要根据实际情况调整补料速度,不单单是补糖。小罐(5-50L)做好了工艺,上大罐又是各种问 ...

做的是蛋白表达吧,虽然我没有做过,但是都需要高密度发酵,所以还有很多共同的特点。你提到抗生素的问题,看来你做的是质粒表达的,但是可以做成营养缺陷性的表达字体的话,不用加抗生素,质粒也能稳定存在。
11楼2016-05-24 20:54:08
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