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可爱多了

金虫 (小有名气)

[求助] 羧基磁珠和氨基DNA连接 已有4人参与

各位大侠,我最近在做羧基修饰的磁珠和氨基修饰的DNA连接,由于我是新手,之前没接触过,请大侠给一份详细的连接步骤,小弟不胜感激
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脚踏实地,遥望远方,成功需要远方的指引和踏实的努力。
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逆流的鱼3623

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 葵葵花花 at 2016-04-20 12:54:21
我的磁珠是100毫克每毫升,每次用15微升。多用少用点没大关系。我连的是抗体,终浓度是100微克每毫升。不过原理是一样的,都是连接羧基和氨基的。检测是否连上了,可以通过水合粒径,电位,红外等表征。最直接的就 ...

电位会有变化么?
还有水合粒径,DNA的大小比纳米颗粒的大小小很多吧,应该没有变化吧~
9楼2016-04-25 16:16:42
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普通回帖

yanliang12

铜虫 (小有名气)

我正在准备做这个方面,同求指导。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-04-15 21:26:27
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可爱多了

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yanliang12 at 2016-04-15 21:26:27
我正在准备做这个方面,同求指导。

你是哪个学校的
脚踏实地,遥望远方,成功需要远方的指引和踏实的努力。
3楼2016-04-16 20:41:06
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阿草乙

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
可爱多了: 金币+5 2016-04-18 21:27:14
I)用EDC和suflo-NHS活化

Ⅱ)活化后配体的固定

Ⅲ)屏蔽未反应的表面
真名士,自风流。
4楼2016-04-17 10:27:34
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可爱多了

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 阿草乙 at 2016-04-17 10:27:34
I)用EDC和suflo-NHS活化

Ⅱ)活化后配体的固定

Ⅲ)屏蔽未反应的表面

能不能把浓度和具体活化时间告诉我,刚刚接触这块,不太懂,我看文献上说5mg MNP溶解在10mM PBS(PH7.4)中,然后加入0.4ml EDC(2mg/ml)和0.2ml NHS(2mg/ml),37度振荡反应2小时,随后磁分离,洗涤后将磁珠重悬在5mlPBS中,向其中加入50ul NH2-DNA,振荡反应2小时,PBS清洗后用1%的BSA封闭
我按照这种方法做,连不上请高手指教
脚踏实地,遥望远方,成功需要远方的指引和踏实的努力。
5楼2016-04-18 21:33:18
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葵葵花花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
可爱多了: 金币+5 2016-04-20 10:31:14
先取一定量磁珠溶解在MES buffer中,加入8mgEDC12mgNHS(量可以变,比例最好不变),超声3分钟,37度震荡15分钟。(弱酸性环境中活化羧基)
分离后加入溶解在生理盐水中的DNA(不用洗涤),37度震荡1小时。加入封闭液封闭反应位点,37度继续震荡1小时。
分离清洗后分散在中性buffer中。

发自小木虫Android客户端
6楼2016-04-19 07:16:43
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可爱多了

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 葵葵花花 at 2016-04-19 07:16:43
先取一定量磁珠溶解在MES buffer中,加入8mgEDC12mgNHS(量可以变,比例最好不变),超声3分钟,37度震荡15分钟。(弱酸性环境中活化羧基)
分离后加入溶解在生理盐水中的DNA(不用洗涤),37度震荡1小时。加入封闭液 ...

磁珠的量和DNA的量方便说一下嘛,然后怎么检测DNA和磁珠是否连接上了,谢谢了
脚踏实地,遥望远方,成功需要远方的指引和踏实的努力。
7楼2016-04-20 10:39:10
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葵葵花花

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 可爱多了 at 2016-04-20 10:39:10
磁珠的量和DNA的量方便说一下嘛,然后怎么检测DNA和磁珠是否连接上了,谢谢了...

我的磁珠是100毫克每毫升,每次用15微升。多用少用点没大关系。我连的是抗体,终浓度是100微克每毫升。不过原理是一样的,都是连接羧基和氨基的。检测是否连上了,可以通过水合粒径,电位,红外等表征。最直接的就是实验现象出来了,那就肯定接上了。

发自小木虫Android客户端
8楼2016-04-20 12:54:21
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shenhaiwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

磁珠是外购的还是自己制备的?确定磁珠没有问题吗?
10楼2016-05-18 11:42:10
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