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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by sandycool at 2016-04-13 16:45:32
这样的问题怎么解决啊？我用primer5.0设计的引物，得分100分，怎么会跑出二聚体呢？
...

得分高不一定好用呀。适当提高退火温度，减少引物量。
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11楼2016-04-13 19:23:11
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梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)
不加模版，作阴性对照可以确定是不是引物二聚体，软件设计的评分再高也要按实验为主，有时候就算软件的评分很低引物也是可以扩出条带的，分数只是参考

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12楼2016-04-13 20:44:44
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sandycool

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 梅太奇阿拉干 at 2016-04-13 20:44:44
不加模版，作阴性对照可以确定是不是引物二聚体，软件设计的评分再高也要按实验为主，有时候就算软件的评分很低引物也是可以扩出条带的，分数只是参考

好的，非常感谢！

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13楼2016-04-13 21:11:02
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yml11

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by sandycool at 2016-04-13 16:42:41
DL2000marker，肯定是二聚体了吧
...

应该是的。不放心的话也可以测序看看

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14楼2016-04-14 13:58:15
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sandycool

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by yml11 at 2016-04-14 13:58:15
应该是的。不放心的话也可以测序看看
...

嗯，好的，谢谢！我重新设计引物

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15楼2016-04-14 16:46:41
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smilyhr

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
marker是DL2000吧，应该是二聚体，引物少用一点
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16楼2016-04-15 14:50:40
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sandycool

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by smilyhr at 2016-04-15 14:50:40
marker是DL2000吧，应该是二聚体，引物少用一点

先是用premix taq，上下游引物各1微，后来用普通的taq酶，减少上下游引物各0.5微，还是二聚体，就是引物的问题了吧。不会继续减少引物的量了吧

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17楼2016-04-15 14:58:48
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jingyu90217

新虫 (小有名气)
阴性也是这样吗？

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18楼2016-04-16 00:53:48
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smilyhr

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by sandycool at 2016-04-15 14:58:48
先是用premix taq，上下游引物各1微，后来用普通的taq酶，减少上下游引物各0.5微，还是二聚体，就是引物的问题了吧。不会继续减少引物的量了吧
...

20微升体系加0.5微升引物是正常的了，既然模版没问题那就是引物的问题，重新合一条吧，18s后面那么多泳道都是同一个东西吗？

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19楼2016-04-16 07:28:40
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sandycool

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by jingyu90217 at 2016-04-16 00:53:48
阴性也是这样吗？

对，跑阴性也是这样，可以确定引物问题

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20楼2016-04-16 08:03:08
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