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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 蛋白酶表达信号肽问题
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暖阳123456

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白酶表达信号肽问题

看到一文献，BL21大肠杆菌表达蛋白酶时分别使用含信号肽的序列和不含信号肽的序列（信号肽位于N端前29个氨基酸），用的pet30a载体，为什么不含信号肽的表达出了，含信号肽的反而没表达？还有包涵体与信号肽有直接关系吗？不是应该有信号肽不容易形成包涵体，更容易可溶性表达吗？

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1楼 2016-04-11 22:33:39
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
含信号肽肯定表达不出来

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暖阳123456
2楼2016-04-11 23:14:40
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暖阳123456

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2016-04-11 23:14:40
含信号肽肯定表达不出来

你好，为什么呢？可是我电泳检测到了呀，只是表达的很少，而且形成了很严重的包涵体。它是不是一定没有酶活呢？

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3楼2016-04-11 23:31:45
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Lily丶

铁虫 (小有名气)
楼主，请问下我去掉信号肽之后，还是没表达，这是为什么呢？

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4楼2016-04-12 23:43:58
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qiaozheng1

木虫 (正式写手)
表达不表达和信号肽没有关系，和序列有关系，可以优化一下，或者换个原核载体，原核不需要信号肽，所以不要加了，包涵体和蛋白本身有关系，真核蛋白在原核里有包涵体，很正常

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5楼2016-04-13 00:12:04
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scofield111

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 暖阳123456 at 2016-04-11 23:31:45
你好，为什么呢？可是我电泳检测到了呀，只是表达的很少，而且形成了很严重的包涵体。它是不是一定没有酶活呢？
...

自身信号肽要切掉，设计个引物，原核表达蛋白，包含体有活性，摇瓶可能测不出来，

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6楼2016-04-13 13:12:03
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Lily丶

铁虫 (小有名气)
问一下，怎样才能形成上清啊？不想要包涵体

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7楼2016-04-19 16:49:59
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暖阳123456

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Lily丶 at 2016-04-19 16:49:59
问一下，怎样才能形成上清啊？不想要包涵体

低温诱导表达，有的28度都能表达出可溶性蛋白。没做过，听别人说的。

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8楼2016-04-19 22:41:59
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青图之图

银虫 (小有名气)
蛋白酶表达信号肽问题

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9楼2016-04-19 23:12:07
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青图之图

银虫 (小有名气)
蛋白酶表达信号肽问题-1

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10楼2016-04-19 23:13:32
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