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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 原核表达
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729881345

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by mars199026 at 2016-04-08 17:05:23
我的那个蛋白在不同时间段差异不大……你在做一下温度和浓度对比看下最保险

谢谢大神支招，你的目的带也是一个小圆蛋嘛？为神马我的不是呢？

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11楼2016-04-08 17:16:28
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mars199026

铜虫 (初入文坛)
我的是表达量都很大，一大团蛋白表达

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12楼2016-04-08 17:17:28
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729881345

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by mars199026 at 2016-04-08 17:05:23
我的那个蛋白在不同时间段差异不大……你在做一下温度和浓度对比看下最保险

嗯，再试一下其他的条件，灰常感谢大神支招，还有个问题你的目的带是一个小圆蛋嘛？为神马我的不是呢，是条件不合适吗？

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13楼2016-04-08 17:19:47
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729881345

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by mars199026 at 2016-04-08 17:17:28
我的是表达量都很大，一大团蛋白表达

好吧，我再试试

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14楼2016-04-08 17:21:30
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忘影逆

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 729881345 at 2016-04-08 17:02:13
做的是条件优化，诱导时间的摸索，但是不知道为什么没有变化？还有条带不是一个圆蛋，老师非说我没诱导出来，这该怎么整？
...

你的载体是Pet32a?,那你的诱导条件都是什么样的呢？
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15楼2016-04-08 17:49:12
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729881345

新虫 (小有名气)
是32a,参考文献里的条件，37℃IPTG1mmol.ml诱导了6h?可能对时间不敏感？？

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16楼2016-04-08 17:55:38
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631783739

木虫 (小有名气)
对照呢

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17楼2016-04-09 15:28:23
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631783739

木虫 (小有名气)
最左边是对照么

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18楼2016-04-09 15:29:12
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prthefu

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也是新手，还没做到表达那部分，但是我想，你提问题，贴图的时候，应该标明自己的目的条带是哪一个，标注一下，这样分析的时候，也好对症下药啊。
还有，诱导过程中，表达的蛋白多少跟时间的关系不是一定的，而且，跟时间的长短关系也不能一概而论。
最后，我虽然还没有做表达，但是我了解到，关于原核表达蛋白，有用IPTG诱导的，但是，还要做诱导条件的优化，关于IPTG的浓度、诱导时间、培养温度等。最终的表达还是需要考虑很多因素的。
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
19楼2016-04-09 19:13:49
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_晚客

银虫 (小有名气)
倒数第三天Maker上面应该是你的目的条带吧，说实话蛋白表达量是不怎么样，比较好的情况就是你说的那样，加IPTG的带是一个小圆蛋，你可以是一下改变一下加IPTG的量，设个梯度，低温诱导，28度和18度，我就是这样做的，载体用的是PET30

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20楼2016-04-09 19:22:07
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