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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » WB遇到的问题
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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by Xllinjy at 2016-04-07 20:56:08
我们是膜在下面，胶在上面，30-35min左右，时间太长会不会有转过的可能啊！

胶应该是靠近黑色夹板的吧？
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漫漫长路，曾孤身独自走远方，幸得到她跟我流浪
11楼2016-04-08 08:38:25
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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by 黑土茉莉 at 2016-04-08 08:32:54
你用丽春红染过了？确定蛋白没转过去？还是目的蛋白本来就没有或者很少？

没用丽春红，但是胶考马斯亮蓝染色了，染色后蛋白条带很清晰，没有marker；膜化显以后，也只能看到marker..
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漫漫长路，曾孤身独自走远方，幸得到她跟我流浪
12楼2016-04-08 08:40:29
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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 古月问你哦 at 2016-04-07 09:25:18
不大清楚你是怎么在处理胶，膜，海绵的过程，但有一点要注意的是三者在处理的过程中不要有气泡，我们实验室常用的是电压100V，时间100min，还有你的的一抗的特异性，灵敏性是否纯在问题。

嗯  气泡是没有的，同样的蛋白，有实验室做过，转膜60min就可以了，不过我们做就是弄不好。。
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漫漫长路，曾孤身独自走远方，幸得到她跟我流浪
13楼2016-04-08 08:42:11
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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by lfkey at 2016-04-07 10:57:00
既然Marker能赚到膜上，说明在某种程度上转膜条件还是可以的，至于膜上没有目标蛋白，就需要你对比分析Marker与目标蛋白的大小，依次来调整和摸索电压以及转膜时间；目标蛋白量太少也可能在转膜后难以肉眼看清的，因 ...

还有就是marker最下面的条带，15KD的未完全转到膜上，其余20-150KD的都转到膜上了。。。
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漫漫长路，曾孤身独自走远方，幸得到她跟我流浪
14楼2016-04-08 08:44:27
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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by star013 at 2016-04-07 15:04:19
我们能给您做，您需要么？

自己实验室需要构建方法，可能不能老拿出去做啊。。
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漫漫长路，曾孤身独自走远方，幸得到她跟我流浪
15楼2016-04-08 09:46:17
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Liumengya

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
marker能转而目的蛋白不行，那挺奇怪的

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16楼2016-04-08 18:44:34
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迭芳芳儿

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能是膜孔径大了，而蛋白小，就跑穿尺／去

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17楼2016-04-09 00:54:25
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的蛋白多大啊  是不是转透了

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18楼2016-04-09 23:12:45
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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 迭芳芳儿 at 2016-04-09 00:54:25
可能是膜孔径大了，而蛋白小，就跑穿尺／去

没有啊  转膜结束后，胶染色上面还有很明显的条带。
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19楼2016-04-11 08:27:02
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小小小亭子

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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19楼: Originally posted by 、悠然浅笑 at 2016-04-11 08:27:02
没有啊  转膜结束后，胶染色上面还有很明显的条带。...

蛋白不能全部转移到膜很正常，PVDF膜加载的蛋白量是有一定限制的，不是多少蛋白都能转上去，我曾经做过实验，做了一个蛋白梯度，上样量最低的总蛋白，100V，3h，都不能完全转过去
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20楼2016-04-23 09:22:35
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