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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)

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6楼: Originally posted by Xllinjy at 2016-04-07 20:56:08
我们是膜在下面,胶在上面,30-35min左右,时间太长会不会有转过的可能啊!

胶应该是靠近黑色夹板的吧?
漫漫长路,曾孤身独自走远方,幸得到她跟我流浪
11楼2016-04-08 08:38:25
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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)

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8楼: Originally posted by 黑土茉莉 at 2016-04-08 08:32:54
你用丽春红染过了?确定蛋白没转过去?还是目的蛋白本来就没有或者很少?

没用丽春红,但是胶考马斯亮蓝染色了,染色后蛋白条带很清晰,没有marker;膜化显以后,也只能看到marker..
漫漫长路,曾孤身独自走远方,幸得到她跟我流浪
12楼2016-04-08 08:40:29
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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)

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3楼: Originally posted by 古月问你哦 at 2016-04-07 09:25:18
不大清楚你是怎么在处理胶,膜,海绵的过程,但有一点要注意的是三者在处理的过程中不要有气泡,我们实验室常用的是电压100V,时间100min,还有你的的一抗的特异性,灵敏性是否纯在问题。

嗯  气泡是没有的,同样的蛋白,有实验室做过,转膜60min就可以了,不过我们做就是弄不好。。
漫漫长路,曾孤身独自走远方,幸得到她跟我流浪
13楼2016-04-08 08:42:11
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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by lfkey at 2016-04-07 10:57:00
既然Marker能赚到膜上,说明在某种程度上转膜条件还是可以的,至于膜上没有目标蛋白,就需要你对比分析Marker与目标蛋白的大小,依次来调整和摸索电压以及转膜时间;目标蛋白量太少也可能在转膜后难以肉眼看清的,因 ...

还有就是marker最下面的条带,15KD的未完全转到膜上,其余20-150KD的都转到膜上了。。。
漫漫长路,曾孤身独自走远方,幸得到她跟我流浪
14楼2016-04-08 08:44:27
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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)

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5楼: Originally posted by star013 at 2016-04-07 15:04:19
我们能给您做,您需要么?

自己实验室需要构建方法,可能不能老拿出去做啊。。
漫漫长路,曾孤身独自走远方,幸得到她跟我流浪
15楼2016-04-08 09:46:17
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Liumengya

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
marker能转而目的蛋白不行,那挺奇怪的

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16楼2016-04-08 18:44:34
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迭芳芳儿

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能是膜孔径大了,而蛋白小,就跑穿尺/去

发自小木虫Android客户端
17楼2016-04-09 00:54:25
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你的蛋白多大啊  是不是转透了

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18楼2016-04-09 23:12:45
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、悠然浅笑

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 迭芳芳儿 at 2016-04-09 00:54:25
可能是膜孔径大了,而蛋白小,就跑穿尺/去

没有啊  转膜结束后,胶染色上面还有很明显的条带。
漫漫长路,曾孤身独自走远方,幸得到她跟我流浪
19楼2016-04-11 08:27:02
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小小小亭子

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
19楼: Originally posted by 、悠然浅笑 at 2016-04-11 08:27:02
没有啊  转膜结束后,胶染色上面还有很明显的条带。...

蛋白不能全部转移到膜很正常,PVDF膜加载的蛋白量是有一定限制的,不是多少蛋白都能转上去,我曾经做过实验,做了一个蛋白梯度,上样量最低的总蛋白,100V,3h,都不能完全转过去
20楼2016-04-23 09:22:35
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