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汕头大学海洋科学接受调剂
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红笺小字

木虫 (小有名气)

[求助] 用pDM4基因敲入,双交换筛不到突变体

宿主菌为假结核耶尔森氏菌,之前用pDM4做过两次基因敲除或敲入,双交换后筛20个左右,有4到5个为突变体。这一次同时做3个,就是在基因组上的目的基因C端融合表达荧光蛋白,单交换都很顺利得到,但是15%蔗糖平板划线后,筛的单菌落都是野生型,每个筛了50个左右。上下游同源臂500到600bp,得不到突变体的原因是什么?请有经验的虫友指点一二,谢谢。
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且行且珍惜。
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虫师、

新虫 (初入文坛)

是用15%蔗糖筛选的吗?单交换的结果用不加抗性的液体摇的吗?

发自小木虫IOS客户端
6楼2017-08-15 15:20:17
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


你的菌对蔗果聚糖毒性不敏感?

发自小木虫Android客户端
2楼2016-04-05 20:47:53
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红笺小字

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2016-04-05 20:47:53
你的菌对蔗果聚糖毒性不敏感?

谢谢您的回复。假结核耶尔森氏菌为肠杆菌科耶尔森氏菌属,革兰氏阴性菌,对蔗果聚糖是敏感的。蔗糖平板划线后除少数sacB基因发生突变外,单菌落都丢失了氯霉素抗性。
且行且珍惜。
3楼2016-04-05 21:51:25
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


4楼2016-04-05 21:58:09
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