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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于短的pcr产物的回收
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zhangchong12

新虫 (小有名气)

[求助] 关于短的pcr产物的回收 已有5人参与

有没有哪位大神知道关于pcr产物小于300bp的回收方法，本来用琼脂糖凝胶回收加入了异丙醇，可是回收的浓度仍然很低，有没有大神知道有哪种方法可效率较高的回收，急求

@biostar2009 @wizardfan 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2016-04-04 18:08:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果片段易得，可以多做几个平行PCR。然后将四五个样回收时用同一个柱子过滤，用35-45ul去洗脱回溶。当然还得加异丙醇。
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2楼2016-04-04 18:55:27
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个要看你的pcr产物浓度有多高，然后来确定造成回收浓度不高的原因，是pcr浓度不高，还是胶回收损失很多？300bp也不是非常小的片段，应该不至于影响回收，祝好！

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
3楼2016-04-04 21:01:40
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普通回帖

zhangchong12

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-04 18:55:27
如果片段易得，可以多做几个平行PCR。然后将四五个样回收时用同一个柱子过滤，用35-45ul去洗脱回溶。当然还得加异丙醇。

我加了异丙醇 可是浓度提高并不是很明显

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4楼2016-04-05 14:03:04
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zhangchong12

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-04-04 21:01:40
这个要看你的pcr产物浓度有多高，然后来确定造成回收浓度不高的原因，是pcr浓度不高，还是胶回收损失很多？300bp也不是非常小的片段，应该不至于影响回收，祝好！

想问下 如果片断在180bp左右 还可以用胶回收吗 今天回收了浓度很小 在8ng每微升

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5楼2016-04-05 14:04:35
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kungfu2016

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
将pcr循环数加大，采用柱子回收

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6楼2016-04-06 23:13:11
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ccandcc

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用高一些浓度的胶回收就可以，我记得好像是3%就行
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7楼2016-04-07 11:18:25
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zhangchong12

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ccandcc at 2016-04-07 11:18:25
用高一些浓度的胶回收就可以，我记得好像是3%就行

是在 用胶回收试剂盒回收的时候 回收不回来 片断187bp

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8楼2016-04-07 11:41:53
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ccandcc

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by zhangchong12 at 2016-04-07 11:41:53
是在 用胶回收试剂盒回收的时候 回收不回来 片断187bp
...

我回收过比你这个更短的，回收不来是不是你pcr出来的量不够。
我们当时是做成非表达质粒，在大肠杆菌中复制，然后酶切胶回收。
更短的弄了好多
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9楼2016-04-08 07:58:55
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zhangchong12

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ccandcc at 2016-04-08 07:58:55
我回收过比你这个更短的，回收不来是不是你pcr出来的量不够。
我们当时是做成非表达质粒，在大肠杆菌中复制，然后酶切胶回收。
更短的弄了好多...

怎样做非表达质粒啊

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10楼2016-04-15 23:04:32
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