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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)

是染色后看不到Marker?
你的分离胶浓度怎么那么低?
11楼2008-10-24 10:36:43
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duanyongzhong

银虫 (正式写手)

这两个胶根本没有区别呀,差别太小了!
12楼2008-10-25 19:16:05
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歪歪爱我爱歪歪

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by duanyongzhong at 2008-10-25 19:16:
这两个胶根本没有区别呀,差别太小了!

因为我分离的蛋白分子量很大,130kD,所以我的分离胶浓度要低一点呀~~
13楼2008-10-27 14:47:25
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)

我用15%的分离胶完全可以把宽分子量的Marker跑开
Marker中最大的蛋白是200kD
所以我感觉你还是把分离胶浓度提高一下吧
14楼2008-10-27 15:14:56
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study236

银虫 (小有名气)

可能电泳方向错了
15楼2008-10-27 15:24:28
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歪歪爱我爱歪歪

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wolfebst at 2008-10-27 15:14:
我用15%的分离胶完全可以把宽分子量的Marker跑开
Marker中最大的蛋白是200kD
所以我感觉你还是把分离胶浓度提高一下吧

真的?15%能分离200kD的?那我下次也提高一点分离胶浓度试试~~~

谢谢啦,啦啦啦啦啦~~
16楼2008-10-28 00:31:45
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nalanzhen33

银虫 (小有名气)

分离胶浓度太小了,应该改用10%-15%的!!!
17楼2008-10-28 07:08:28
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xiaosrr

铜虫 (小有名气)

LZ选用的MARKER是否合胶浓度匹配...如果不匹配会导致MARKER跑不出来....
18楼2008-12-03 14:54:07
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hnanxxl

金虫 (正式写手)

这是不连续缓冲体系,所以分离胶和浓缩胶应该有较大的梯度差别,浓缩胶只是将样品浓缩到一个起跑线上,分离胶才能将样品分开。如果不知道分子量大小,一般的做法是首次试验时将分离胶配制成7.5%的浓度,根据试验结果在调整胶的浓度。如果胶的浓度太大,样品进入胶中都很困难,所以也很难分开;如果浓度过小,样品迁移速度太快,可能早就跑到胶外了。两种情况都看不到样品带。楼主所示图片中只是指示剂的位置说明不了什么问题。不过从图片中可以看出,你所做的胶并不均匀,在灌胶时还是应该掌握一些技术。
19楼2008-12-04 17:47:34
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hnanxxl

金虫 (正式写手)

这是不连续缓冲体系,所以分离胶和浓缩胶应该有较大的梯度差别,浓缩胶只是将样品浓缩到一个起跑线上,分离胶才能将样品分开。如果不知道分子量大小,一般的做法是首次试验时将分离胶配制成7.5%的浓度,根据试验结果在调整胶的浓度。如果胶的浓度太大,样品进入胶中都很困难,所以也很难分开;如果浓度过小,样品迁移速度太快,可能早就跑到胶外了。两种情况都看不到样品带。楼主所示图片中只是指示剂的位置说明不了什么问题。不过从图片中可以看出,你所做的胶并不均匀,在灌胶时还是应该掌握一些技术。
20楼2008-12-04 17:48:41
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