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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助，我的SDS-PAGE 样品怎么扩散跑成一条线了？
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)
是染色后看不到Marker?
你的分离胶浓度怎么那么低?
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11楼2008-10-24 10:36:43
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duanyongzhong

银虫 (正式写手)
这两个胶根本没有区别呀，差别太小了！
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12楼2008-10-25 19:16:05
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歪歪爱我爱歪歪

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by duanyongzhong at 2008-10-25 19:16:
这两个胶根本没有区别呀，差别太小了！

因为我分离的蛋白分子量很大，130kD，所以我的分离胶浓度要低一点呀~~
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13楼2008-10-27 14:47:25
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)
我用15%的分离胶完全可以把宽分子量的Marker跑开
Marker中最大的蛋白是200kD
所以我感觉你还是把分离胶浓度提高一下吧
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14楼2008-10-27 15:14:56
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study236

银虫 (小有名气)
可能电泳方向错了
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15楼2008-10-27 15:24:28
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歪歪爱我爱歪歪

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wolfebst at 2008-10-27 15:14:
我用15%的分离胶完全可以把宽分子量的Marker跑开
Marker中最大的蛋白是200kD
所以我感觉你还是把分离胶浓度提高一下吧

真的？15%能分离200kD的？那我下次也提高一点分离胶浓度试试~~~

谢谢啦，啦啦啦啦啦~~
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16楼2008-10-28 00:31:45
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nalanzhen33

银虫 (小有名气)
分离胶浓度太小了，应该改用10%-15%的！！！
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17楼2008-10-28 07:08:28
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xiaosrr

铜虫 (小有名气)
LZ选用的MARKER是否合胶浓度匹配...如果不匹配会导致MARKER跑不出来....
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18楼2008-12-03 14:54:07
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hnanxxl

金虫 (正式写手)
这是不连续缓冲体系，所以分离胶和浓缩胶应该有较大的梯度差别，浓缩胶只是将样品浓缩到一个起跑线上，分离胶才能将样品分开。如果不知道分子量大小，一般的做法是首次试验时将分离胶配制成7.5%的浓度，根据试验结果在调整胶的浓度。如果胶的浓度太大，样品进入胶中都很困难，所以也很难分开；如果浓度过小，样品迁移速度太快，可能早就跑到胶外了。两种情况都看不到样品带。楼主所示图片中只是指示剂的位置说明不了什么问题。不过从图片中可以看出，你所做的胶并不均匀，在灌胶时还是应该掌握一些技术。
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19楼2008-12-04 17:47:34
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hnanxxl

金虫 (正式写手)
这是不连续缓冲体系，所以分离胶和浓缩胶应该有较大的梯度差别，浓缩胶只是将样品浓缩到一个起跑线上，分离胶才能将样品分开。如果不知道分子量大小，一般的做法是首次试验时将分离胶配制成7.5%的浓度，根据试验结果在调整胶的浓度。如果胶的浓度太大，样品进入胶中都很困难，所以也很难分开；如果浓度过小，样品迁移速度太快，可能早就跑到胶外了。两种情况都看不到样品带。楼主所示图片中只是指示剂的位置说明不了什么问题。不过从图片中可以看出，你所做的胶并不均匀，在灌胶时还是应该掌握一些技术。
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20楼2008-12-04 17:48:41
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