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zxf0306

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】抗氧化有关实验应该做那些

本人最近想做一个植物的体外抗氧化作用,不知道都应该做那几个方面的实验,(实验经费不是很多,想做一下这个植物的初步的抗氧化活性,做个比较)
有知道的请告知,谢谢

[ Last edited by kidy008 on 2008-11-6 at 01:57 ]
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pcwl070501

金虫 (正式写手)

做体外抗氧化作用可用下列三种方法
总还原能力测定
清除羟自由基能力测定
清除超氧阴离子自由基能力测定
花钱不多,我经常用
《食品科学》杂志第六期上有篇文章对这几种方法进行了评价——《天然抗氧化物体外活性评价方法的优选与优化》
2楼2008-10-22 15:39:44
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mooncake_333

铜虫 (小有名气)

可以用一下磷苯三酚自氧化法,它是测超氧化物歧化酶的方法,实用且便宜,但条件需要自己在摸一下
3楼2008-10-22 17:29:54
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fangyihong

银虫 (小有名气)

清除羟基自由基

原理:
用 Fenton反应法产生羟基自由基(•OH ):
Fe2+ + H2O2→Fe3 ++ OH - + • OH
由于•OH可特异使藩红花的红色褪色,根据褪色程度用比色法来衡量•OH的含量。藩红花红在波长520nm处有最大吸收波长,在体系中加入具有清除测量•OH功能的被测物,若能及时清除•OH,则藩红花红的褪色程度降低,从而导致吸光值减小的程度降低。因而采用固定反应时间法,在波长520nm处测量含被测物反应液的吸光度,并与空白液比较,从而测定被测物对•OH的清除作用。吸光度越高,清除•OH的效果越好。
方法:
5.3.2.2 方法
反应体系中加入100mmol/LPB(pH=7.4) 1.0mL,520μg/L藩红溶液0.2mL,10mmol/LEDTA Na2-Fe(Ⅱ)0.7mL,10mmol/LH2O2(新鲜配制)0.8mL和一定体积的样品溶液,总体积4.0mL,不足者以蒸馏水补足。37℃恒温1h,在520nm处测定吸光值,每个试验作3个平行样。空白组以蒸馏水代替样品溶液,对照组以蒸馏水代替EDTA Na2-Fe(Ⅱ)和样品溶液。以甘露醇作为参比物,考察样品清除•OH的能力。
清除率计算公式:
羟基自由基清除率S1(%)=(A样品-A空白) /(A对照-A空白)×100%
4楼2008-10-23 11:17:42
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fangyihong

银虫 (小有名气)

清除超氧阴离子


kidy008(金币+1,VIP+0):热心助人,奖励金币一个,谢谢,欢迎常来小木虫食品版~~!
原理
利用邻苯三酚在弱碱性介质中会自身氧化分解产生有色中间物和O2•-:
O2•-对自氧化又起催化作用,此有色物质在325nm处有最大吸收波长,依据有色中间物的生成量,判断O2•-的生成量。若体系中加入清除O2•-的物质,则会减少有色物质的生成,吸光度降低。吸光度越低,清除O2•-的效果越好。
方法:
取一定体积的样品溶液,以蒸馏水定容为1.0mL,加入3mL Tris-HCl (pH=8.2),25℃水浴20 min后,加入100μL 10mmol/L邻苯三酚,精确反应4min,滴入100μL 6mol/LHCl终止反应,在325nm处测定吸光值。每个试验作3个平行样。空白组以蒸馏水代替样品溶液。以抗坏血酸作为参比物,考察样品清除O2•-的能力。
清除率计算公式:
超氧阴离子清除率S2(%)=(A空白-A样品) /A空白×100%。
5楼2008-10-23 11:19:18
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fangyihong

银虫 (小有名气)

总还原能力测定

样品还原能力的测定参考Oyaizu的方法并略作修改[133]。不同浓度的样品 (1mL)与磷酸缓冲溶液(0.2mL,0.2mol/L,pH6.6)、1%铁氰化钾(1.5 mL)混合,混合物在50℃下水浴加热20 min,速冷,加入三氯乙酸(1ml,10 %,w /V),混匀后以1000g离心10min,取2mL上清液,加入0.5 mL 0.3% 三氯化铁及3mL蒸馏水。摇匀后以蒸馏水调零,测定A700。A700越大表示,还原能力越强。试验用蒸馏水作为无还原能力的样品对照,Vc作为有还原能力的样品对照。
6楼2008-10-23 11:20:24
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fangyihong

银虫 (小有名气)

这些方法是我自己有动手做过的,可行性应该没什么问题,也几乎不要花什么钱,就是几个必要的药品买一下,只要实验室有试管,移液管,恒温槽,分光光度计就可以了。
7楼2008-10-23 11:22:55
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雄起

铁杆木虫 (知名作家)

我做过超氧自由基 羟自由基 抗油脂过氧化 都很便宜
我是马甲,但是我很守emuch法。
8楼2008-11-01 20:13:05
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