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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 载体构建问题
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
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1楼2016-03-24 20:46:21
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rfywoaini

银虫 (初入文坛)
挑单菌落吧，多找几个，7个左右吧

发自小木虫IOS客户端
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萧瑟秋风今又是，换了人间。
5楼2016-03-29 21:12:35
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star013

新虫 (知名作家)
我们帮你构建如何\

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-25 07:15:06
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2016-03-25 08:13:42
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jackie在努力

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
-字仲康: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-03-29 22:09:20
如果感受态和操作都没问题的话：
①不知道楼主是否比较过胶回收后的载体片段和目的片段的浓度；
②另外楼主可以用相同浓度的载体的做下单酶切实验（分别sacI和NdeI），并和双酶切一起跑胶看下结果，看下是不是NdeI的活性不高，我们实验室一般50微升的体系右2.5微升的酶
③saCI 和 Nde双酶切会切去50bp左右的片段，不知道提高楼主的琼脂糖浓度可不可以分辨出
④另外连接效率不高的可以过夜连接，培养液离心浓缩，多挑几个单菌落（多挑几个不会浪费很多时间）
赞一下 回复此楼
4楼2016-03-29 20:07:55
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