24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1575  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

-字仲康

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苦逼岁月

新虫 (正式写手)

大家好,我是新手对于构建质粒!
第一个问题是如何看质粒上的MCS(多克隆位点),是质粒图谱上标准的所有酶切位点上都是MCS,还是只是粗黑色箭头表示的区域是MCS?
第二个问题就是我实际中的碰到的问题,本实验室只有pET-32a这个表达载体,然而我老师想用pET-SUMO这个质粒,所以我们就自己构建;我们首先问别人要到了SUMO基因的模版,然后分别用带有酶切位点的引物把SUMO基因扩出来酶切(Ndel+Bamh1);然后用Ndel+Bamh1酶切质粒pET-32a;然后连接转化,现在总是做不出来,问题就是这样做有问题么?嗯,我也问了群里的一些人,他们说你这样做应该做不出来,他们说我用Ndel这个酶切位点第一不再MCS上,第二他有两个酶切位置,你这样酶切会把质粒切碎,破坏质粒的完整性,肯定扩不出来!所以我想请问大家一下!!!!
8楼2016-08-16 09:42:11
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 -字仲康 的主题更新
信息提示
请填处理意见