应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » q-pcr高手来指点一下
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1366  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

蜂鸟404

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] q-pcr高手来指点一下 已有1人参与

有没有荧光定量高手，请教一个问题，做荧光定量pcr时，我用的内参的表达量和目的基因的表达量差异太大，内参ct值在15以下，目的基因ct值在40左右或者看不到曲线，这时该怎么办，如果不换内参，把内参的模板稀释一定倍数而目的基因模板不稀释可以吗
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-03-14 19:45:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

G号糖

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 蜂鸟404 at 2016-05-24 19:12:11
我那个没解决，不过你这个可以呀，ct值在15到30就可以你的符合要求
...

是吗？那怎么我的同学都说要在25到30之间才可以

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-05-25 08:01:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
目的基因Ct值在40以上基本上可信度就很低了，要么是引物结合不好，要么是基因表达量低。通常这样需要重新设计引物（引物非保守区，无发卡，互补尽可能少，特别是3端），或者精细取材找到表达高点的地方提取RNA。另外内参和目的基因的模板是同一个，这样做定量才会有可比性。



如果以上还是不能解决，而有需要表达量的数据，退而取其次做半定量吧。
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-14 20:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蜂鸟404

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 20:30:43
目的基因Ct值在40以上基本上可信度就很低了，要么是引物结合不好，要么是基因表达量低。通常这样需要重新设计引物（引物非保守区，无发卡，互补尽可能少，特别是3端），或者精细取材找到表达高点的地方提取RNA。另外 ...

我是做细菌的，内参选择比较少，引物我看了没有问题，而且我用普通pcr扩了，特异性很强，我现在怀疑是不是没有表达或者表达量太低，我准备用cdna模版扩增一次普通pcr 跑个胶看看，有没有带

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-03-14 20:43:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蜂鸟404 at 2016-03-14 20:43:56
我是做细菌的，内参选择比较少，引物我看了没有问题，而且我用普通pcr扩了，特异性很强，我现在怀疑是不是没有表达或者表达量太低，我准备用cdna模版扩增一次普通pcr 跑个胶看看，有没有带
...

表达低可能比较大。
赞一下 回复此楼
4楼2016-03-14 21:36:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 370求调剂 +3 080700调剂 2026-03-30 3/150 2026-03-31 01:09 by A_Zhe
[考研] 生物考研337分求调剂 +3 cgxin 2026-03-30 4/200 2026-03-30 23:00 by Evan_Liu
[考研] 一志愿华东师范大学有机化学专业，初试351分，复试被刷求调剂! +7 真名有冰 2026-03-29 8/400 2026-03-30 21:08 by maaj02
[考研] 一志愿中海洋材料357 +3 麦恩莉. 2026-03-30 3/150 2026-03-30 21:01 by chixmc
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂 +25 稻妻小编 2026-03-26 25/1250 2026-03-30 20:11 by 滴滴上岸呀
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +7 JKSOIID 2026-03-26 7/350 2026-03-30 20:10 by 滴滴上岸呀
[考研] 26考研-291分-厦门大学（085601）-柔性电子学院材料工程专业求调剂 +5 min3 2026-03-24 6/300 2026-03-30 18:42 by 544594351
[考研] 化工专硕求调剂 +5 question挽风 2026-03-24 5/250 2026-03-30 18:34 by tianyyysss
[考研] 292求调剂 +13 是妍子也是研子 2026-03-30 13/650 2026-03-30 18:01 by 小徐0109
[考研] 311求调剂 +10 lin0039 2026-03-26 10/500 2026-03-30 10:26 by herarysara
[考研] 2026年华南师范大学欢迎化学，化工，生物，生医工等专业优秀学子加入！ +3 llss0711 2026-03-28 6/300 2026-03-29 10:26 by llss0711
[考研] 356求调剂 +3 gysy?s?a 2026-03-28 3/150 2026-03-29 00:33 by 544594351
[考研] 312，生物学求调剂 +3 小译同学abc 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:32 by 落睿可思
[考研] 299求调剂 +7 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 7/350 2026-03-28 13:09 by 唐沐儿
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 12:04 by 王保杰33
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 调剂推荐 +5 清酒714 2026-03-26 6/300 2026-03-27 11:12 by 不吃魚的貓
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭