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质粒提取酶切已有2人参与
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提完质粒可以直接酶切吗，还是说一定要胶回收以后再酶切 发自小木虫IOS客户端 |
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ken19860823
木虫 (正式写手)
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| 我查了下你的PcoldTF载体，载体的多克隆位点我放在了附件里，多克隆位点的酶切位点是为克隆准备的所以载体其他片段不含有这些酶切位点。常见的位点有，xhoI,kpnI,NdeI,BamHi,HindIII,salI,xbaI,另外两个更常见怕片段里面含有所以一般选不到。如果你的克隆的片段A不含有EcoRI和HindIII，你就可以设计引物分别包含这两个位点，做PCR，一般我们是先克隆到T载体，如果你是用高保真酶做的PCR，P完之后用TAQ酶处理15min在72度，目的是非保证酶一般在扩增片段末端加一个A，这样可以直接连进T载体，连到载体后方便做测序挑选正确的克隆。选到正确克隆后做酶切，切出来的对应大小的A片段后纯化连到同样用EcoRI和HindIII酶切的PcoldTF载体里就行了。 |
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2016-03-09 17:30:52, 14.14 K
12楼2016-03-09 17:39:01
2楼2016-03-08 20:43:24
Bioexperixgs
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3楼2016-03-08 23:02:26
匿名
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4楼2016-03-08 23:59:35