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Lee_log

新虫 (初入文坛)

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[求助] 关于hplc内标法的问题已有1人参与

本科三年级一枚，跟随研二师姐做关于微生物降解污染物的实验。用的标准曲线法测降解后的含量，由于实验室的液相六通阀漏液，对于同一个样品，测出来的峰面积常常会越来越大（就算定量进样，感觉被带进到柱子里的量还是会变）。由于短时间内还要用这个坏的仪器，我就想，能不能用内标法去尽量减少这种误差。我想以前外标误差的原因是进到柱子里的样品量不正常，而内标法是对进样量和操作手法要求并没有十分严格。我想到的是以下:配制已知浓度的梯度标液，加入定量的标准物。对于同一针进样，Ci/Cs=fiAi/fsAs，由此标液求得(fi/fs)=Rf，对未知浓度测样也保持相同标准物，那么未知样品浓度即为C=(Rf*Cs)*(A/As)。小生不才，想的东西乱且不知对错。还望各位前辈点拨。

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1楼 2016-03-07 16:21:11

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引用回帖:

6楼: Originally posted by 木易十日十月 at 2016-03-07 21:39:16
如果六通阀漏液你用内标法也不会更好的，因为你重复性差，校正因子本身就不对。你是怎么确定它漏液的，如果仅仅是漏液那就简单了，你用扳手重新把接头紧一遍就好了。感觉你虽然大三能想到并愿意做这些挺好的，我大学 ...

那个随着进样次数增多，进样口会自己滴液下来。做标曲的时候可能浓度跨度较大，而且只做前面几次，标曲也很准。只是后来我们测降解程度，十几个样，大家降解程度差不多的时候，重复测的时候发现重复性不好。我们当然也不是说明知仪器有问题也做下去，对实验数据不负责。只是好像这台家伙过几个月要换了，所以修那边可能尴尬点。但实验还是要接着做的，而且现在还在筛选阶段，是要比较出一个顺序，选到后肯定是挑最好的来重新做实验数据的。

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