应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 去磷酸化酶
51/1返回列表
查看: 3768  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yeruge

新虫 (小有名气)
已领完
去磷酸化酶
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫，下载小木虫客户端

对载体进行双酶切，需要去磷酸化吗？如果要，去磷酸化酶是在酶切反应之后加，还是酶切片段割胶纯化后再加？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2016-03-03 18:55:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yeruge

新虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-03 21:26:13
我的意思是，双酶切不进行磷酸化，一般是可以满足你的实验要求的！当然你这里说的切胶回收，和能不能避免自连是没有关系的，打个比方即使你切胶回收，如果酶切不完全，回收的片段里同样会有双酶切的载体和单酶切的 ...

后续实验载体自连，就会出现假阳性？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
25楼2016-03-03 22:56:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

longwave

木虫之王 (文学泰斗)
谢谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
12楼2016-03-03 18:55:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原海亮

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
双酶切是否需要去磷酸化，取决于你构建克隆的目的，如果一般克隆的话，只要保证酶切充分些，获得正确克隆概率还是可以的，如果构建文库之类的，最好有去磷酸化处理，保证文库中克隆的连接效率。去磷酸化我们同常在回收获得载体片段后再进行的。PS.虽然我进来已经没有金币了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yeruge
13楼2016-03-03 19:01:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
双酶切不需要去磷酸化的，因为两个酶切位点粘性末端应该不同，在酶切完全的前提下，不会发生载体自连。
并且，载体去磷酸化之后，会影响后续的连接效率。
最后，鄙视那些只领红包不帮忙的人……
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yeruge
14楼2016-03-03 19:02:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
rnydufe2楼
2016-03-03 18:55   回复  
yeruge(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
11766639833楼
2016-03-03 18:55   回复  
yeruge(金币+6): 谢谢参与
已获得6个金币 发自小木虫Android客户端
beverish4楼
2016-03-03 18:55   回复  
yeruge(金币+2): 谢谢参与
已获得2个金币 发自小木虫Android客户端
wht123zzy5楼
2016-03-03 18:55   回复  
yeruge(金币+10): 谢谢参与
已获得10个金币 发自小木虫Android客户端
187659257766楼
2016-03-03 18:55   回复  
yeruge(金币+7): 谢谢参与
已获得7个金币 发自小木虫Android客户端
longwave7楼
2016-03-03 18:55   回复  
yeruge(金币+9): 谢谢参与
已获得9个金币 发自小木虫Android客户端
W菜鸟驿站T8楼
2016-03-03 18:55   回复  
yeruge(金币+3): 谢谢参与
已获得3个金币 发自小木虫Android客户端
金黄球菌t9楼
2016-03-03 18:55   回复  
yeruge(金币+8): 谢谢参与
已获得8个金币 发自小木虫Android客户端
sdp_sqf10楼
2016-03-03 18:55   回复  
yeruge(金币+4): 谢谢参与
已获得4个金币 发自小木虫Android客户端
zbwlll11楼
2016-03-03 18:55   回复  
查看全部 25 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金不中，共勉 +10 eulota 2026-08-26 10/500 2026-08-27 17:23 by lqllinqiaoli
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +10 晴天加油 2026-08-26 11/550 2026-08-27 16:35 by msuhlx
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭