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求助：inner不出带
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各位兄弟姐妹们，我在做race pcr 3`端，outer出了一条带，约700bp，比我的目标序列小大约300bp，而inner没有条带。天天被老板骂，哪位好心人帮我分析一下原因吧！ 我的序列CCCGGGCGAGCAACTACGTGATGGAGAAGACATTCAAGGGACTGGAGGCATACGAGTGGTACTCAAAGGACATCTCCCGCTCCATGGCCGAACAGCTGCTCAAGGAAGAGGGAAAAGAAGGAGGATTTGTCGTAAGAGACTCGAGCCATGCCGGAGTTTACACCGTGTCCATATACACCAACAGTTTGGGTGACACTGGCGTTGTGAAGCACTATCAGATCAAGGAAGTGTGTGAACCACAGAGGATGTACTACGTTGCTGAAAACCACCTCTTTGAAAACATCCCGAGTCTCATCCACTATCACCAGCACAACTCGGCAGGGCTGGTGGCGCGGCTGAAACATTCGGCGTTGACACGGGCCAGGACGGCTTCTTTCTCCTCAGGCCAGAGCAGTCAATGGGAGATCGATCCGAGTGAGCTGAGCCTCCTGCAGGAGCTGGGGAGTGGGCAGTTTGGCGTGGTGCGTCTGGGCGTGTGGAAGCGCGTACGAGGCAACGTGGCCATCAAGATGCTGCACGAGGCCACCATGTCCGAAGACGACTTCGTTGAGG 引物 扩Cccggg端 Outer primer 5’atggagcgggagatgtcctttgagt3’ 25bp Inner primer 5’ctcgtatgcctccagtcccttgaatgtctt3’ 30bp 扩agg端 Outer primer 5’gtttgggtgacactggcgttgtgaagc3’ 27bp Inner primer 5’actatcaccagcacaactcggcagg3’ 25bp 用的退火温度outer是64和69 都出了700bp的条带 inner是60和64 什么都没有 |
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