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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母表达酶
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ConnConn

新虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 肉肉肉. at 2016-02-29 16:14:15
嗯嗯 不优化的话影响大吗
...

这要具体分析了，没有特定物种的稀有密码子就ok。有些网站可以针对不同物种进行稀有密码子优化，你在谷歌上检索密码子优化就能找到这些网站。

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11楼2016-02-29 16:24:21
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
需要载体联系我，我有很多毕赤酵母载体

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12楼2016-02-29 16:31:33
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evil丶zero

金虫 (小有名气)
额，时隔几个月又在小木虫上看见你的帖子了，不过现在已经没做毕赤酵母了该做枯草芽孢杆菌了

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13楼2016-02-29 16:35:02
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
肉肉肉.: 金币+20, ★★★★★最佳答案, 多谢大神 2016-03-01 14:37:40
，1.原核来源的蛋白在酵母中表达是不是一定需要做密码子优化？这个问题看情况，你先下载毕赤酵母的稀有密码子表，你的酶里不是有太多毕赤酵母稀有密码子的话就不用优化。
2.做了密码子优化会不会对这种酶的性质产生影响？不做优化的酶可以在酵母中成功表达吗？
酶的性质不会变。酶序列连进去过，不一定能成功表达。
毕赤酵母是真核表达了，你用原核细菌来源的酶去真核表达，会让酶在折叠上比原核的更精度些。但酶的活性就不一定了，你要电转的话，最好叫个师哥师姐带下，新手往往会失败很多次的。
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采菊东篱下，悠然见南山。
14楼2016-02-29 16:51:27
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肉肉肉.

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by evil丶zero at 2016-02-29 16:35:02
额，时隔几个月又在小木虫上看见你的帖子了，不过现在已经没做毕赤酵母了该做枯草芽孢杆菌了

你做成功啦？

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15楼2016-02-29 18:59:16
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evil丶zero

金虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 肉肉肉. at 2016-02-29 18:59:16
你做成功啦？
...

没有，转化还好，但是没有检测出酶活性
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16楼2016-02-29 22:32:45
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
可以试一下，有的细菌来源在酵母里表达挺好的，有的就不行。曾经做过半年的毕赤表达，硬是不产蛋白。
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17楼2016-03-03 08:48:20
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该进行密码子优化，毕竟真核原核表达过程还是有区别的，但是产生的蛋白包括一级结构等等都是不会变化的，但是在酵母中表达会使蛋白糖基化以及形成正确折叠的二硫键等好处，所以酵母表达还是很好的，只不过产量会较真核低，而且表达周期较长，过程繁琐
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18楼2016-03-03 19:57:10
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