有关大肠杆菌CRISPR/Cas9基因敲除
你们有谁做过大肠杆菌BW25113 Cas9 大片段基因敲除吗，最近在做，筛选到的总是假阳性，检测Cas质粒和TargetF质粒都在，但是就是不敲除，大神们帮忙分析一下原因
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是不是靶点效率不高，换靶点试试
大肠杆菌敲除一般不用crispr/cas9, 用重组酶的更多
我怀疑是靶点问题，不过我做了双sgRNA敲除，还是不行，也可能是同源重组酶诱导的不行，导致凡是切割的没有同源重组上，都死了，长出来的都是没有经历过切割的。当然只是猜测，我也觉得靶点效率不高是最有可能的
，
哎，我们老板就是要让我走通CRISPR/Cas9 我也是很无奈啊
有验证Cas质粒是正确的吗？
这个我倒是验证过，因为我现在敲除短的片段没有问题（2k以内）长的就不行了。
还有我想问一下，您做过原核单启动子下表达多个基因吗，这些基因要单独表达，而不是串联起来的。