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环介导等温扩增LAMP相关问题求解答,万分感谢!

作者 这周你汇报
来源: 小木虫 1200 24 举报帖子
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最近刚接触LAMP,用primer explorer设计了内引物和外引物,暂时没有加环引物。参考了文献中的LAMP反应体系,用钙黄绿素进行检测。第一次按照文献中的方法模板DNA 1 微升、钙黄绿素浓度为25 微摩尔每升,钙黄绿素加入体系后基本看不到颜色,观察不到扩增前后的变化,最后拿去跑电泳,发现根本没有条带。第二次改进实验,加了2微升模板DNA,钙黄绿素浓度也增加了,但是水浴60分钟后溶液还是橙红色,应该是没扩增,拿去跑电泳,依然啥也没有。第一条道Marker是100bp的,中间是我测的扩增之后的,最后两条道是扩增前的。不知道是哪里出了问题,是一开始引物就不对吗?求大神解答 万分感谢

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  • 精华评论
  • 高高高

    你做完了再加试一下颜色变化

  • 长得不高

    你先确认引物set没有问题,一般钙黄绿素体系中需要Mn2+。最好是看紫外下的荧光,可见光下的颜色变化不是特别明显的。

  • 这周你汇报

    引用回帖:
    2楼: Originally posted by 高高高 at 2021-03-26 11:15:46
    你做完了再加试一下颜色变化

    谢谢,后面没有加钙黄绿素,直接去跑电泳,能看到扩增出来了。

  • 这周你汇报

    引用回帖:
    3楼: Originally posted by 长得不高 at 2021-04-08 16:55:01
    你先确认引物set没有问题,一般钙黄绿素体系中需要Mn2+。最好是看紫外下的荧光,可见光下的颜色变化不是特别明显的。

    谢谢,引物set是可行的。后面我试了不加钙黄绿素和氯化锰,就能扩出来了

  • 琛琛:

    我最近也在做LAMP,希望多多交流!

  • Amber123456

    我也在做LAMP。天天做不出来结果

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