环介导等温扩增LAMP相关问题求解答,万分感谢!
最近刚接触LAMP,用primer explorer设计了内引物和外引物,暂时没有加环引物。参考了文献中的LAMP反应体系,用钙黄绿素进行检测。第一次按照文献中的方法模板DNA 1 微升、钙黄绿素浓度为25 微摩尔每升,钙黄绿素加入体系后基本看不到颜色,观察不到扩增前后的变化,最后拿去跑电泳,发现根本没有条带。第二次改进实验,加了2微升模板DNA,钙黄绿素浓度也增加了,但是水浴60分钟后溶液还是橙红色,应该是没扩增,拿去跑电泳,依然啥也没有。第一条道Marker是100bp的,中间是我测的扩增之后的,最后两条道是扩增前的。不知道是哪里出了问题,是一开始引物就不对吗?求大神解答 万分感谢
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今日热帖
你做完了再加试一下颜色变化
你先确认引物set没有问题,一般钙黄绿素体系中需要Mn2+。最好是看紫外下的荧光,可见光下的颜色变化不是特别明显的。
谢谢,后面没有加钙黄绿素,直接去跑电泳,能看到扩增出来了。
谢谢,引物set是可行的。后面我试了不加钙黄绿素和氯化锰,就能扩出来了
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我最近也在做LAMP,希望多多交流!
我也在做LAMP。天天做不出来结果