酶容易降低酶活怎么办？
用大肠杆菌表达胞内酶，每次都是从-80℃划线后再培养的，但发现前几次实验酶活还可以，后面重复的时候发现酶活降低了很多，培养条件都是一样的……很是惆怅……
有大佬了解是什么原因吗？还有，大肠杆菌菌体如果放冰上过夜再破壁的话，会对酶活有影响吗？
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gg
1
感谢回复，是把菌体离心放冰上的
请问这个菌液的表达水平要怎么定量呢？是通过蛋白浓度定量吗
，
WB定量菌液破碎后的上清。
当然有的时候诱导表达的条带在总可溶蛋白中非常明显，可以跑一个总可溶蛋白的考马斯蓝染色就够了。
yy