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关于EDC/NHS 反应

作者 幻雪水晶: 来源: 小木虫 1750 35 举报帖子

请教做过EDC、NHS反应的同学，在羧基修饰的纳米微球上修饰蛋白，以10mg/ml 的EDC和10mg/ml NHS来活化羧基1 h，pH5.0，然后在pH7.2左右加入蛋白，37摄氏度恒温培养2h，但偶联效果一直不太好，请问各位，我的实验过程有什么问题，或者大家有什么好的建议，请帮忙提一下，不胜感激啊返回小木虫查看更多

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精华评论

aircraftvip

1. EDC反应的最佳条件是pH 4.5 (或者在4-6范围之间），中性条件下效率大大降低。
2.反应时间2h太短了，延长到12h会好很多。
3. 室温足够了。
4.反应完应考虑用透析或柱子把小分子量的脲除掉。
good luck!
ethmit1

楼主可以试试在PBS (pH=7.4, 0.01M)的条件下进行。EDC与Sulfo-NHS的摩尔量比10：1，室温下反应10个小时以上应该足够。EDC在水相会分解的，Sulfo-NHS起稳定作用，所以EDC要过量。你先试试啊，然后再跟我说下管用不。
ethmit1

对了，不用活化1个小时，混在一起同时进行即可。我做的EDC/Sulfo-NHS反应还比较成功
幻雪水晶

引用回帖:
4楼: Originally posted by ethmit1 at 2013-05-18 00:45:18
对了，不用活化1个小时，混在一起同时进行即可。我做的EDC/Sulfo-NHS反应还比较成功

意思是直接将EDC/NHS还有蛋白一起溶解在PBS中然后室温反应12h吗？刚开始做这个实验，很多地方不懂，还请多多指教啊
幻雪水晶

引用回帖:
2楼: Originally posted by aircraftvip at 2013-05-17 22:48:33
1. EDC反应的最佳条件是pH 4.5 (或者在4-6范围之间），中性条件下效率大大降低。
2.反应时间2h太短了，延长到12h会好很多。
3. 室温足够了。
4.反应完应考虑用透析或柱子把小分子量的脲除掉。
good luck!

我是将EDC和NHS溶解在pH5左右的MES溶液中活化羧基，然后移去废液，再将溶解在PBS7.2左右中的蛋白加进去和羧基偶联的，蛋白的反应pH不是应该在偏碱条件下进行的吗，若将偶联反应也在pH5左右进行，偶联效果会不会不好
，
ethmit1

引用回帖:
5楼: Originally posted by 幻雪水晶 at 2013-05-18 17:52:56
意思是直接将EDC/NHS还有蛋白一起溶解在PBS中然后室温反应12h吗？刚开始做这个实验，很多地方不懂，还请多多指教啊...

活化是在弱酸条件下比较好，酰胺键偶合在弱碱条件下进行，接近中性的环境可以同时兼顾两者。祝你好运啊
幻雪水晶

引用回帖:
7楼: Originally posted by ethmit1 at 2013-05-18 19:23:42
活化是在弱酸条件下比较好，酰胺键偶合在弱碱条件下进行，接近中性的环境可以同时兼顾两者。祝你好运啊 ...

嗯，我先试试看，谢谢帮助啦，