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lcmfriend

金虫 (小有名气)


[求助] 纤维素酶活已有2人参与

按照NY/T912-2004方法进行纤维素酶活力测定。结果酶空白样的吸光度AB大于酶反应液的吸光度AE,甚至结果都是负的。
不知道问题出在哪?
做了好多次了,结果总是不尽人意。
希望指导!多谢
酶样1、 2 为固体样品,经乙酸-乙酸钠浸提,离心后测定。
菌样1、 2为液体样品,直接离心后测定。
反应时间:沸水浴30min

纤维素酶活
QQ图片20151216090014.png
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赵晴之ZQ

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是37℃水浴反应30分钟,不是沸水浴30分钟吧
2楼2017-03-01 11:28:47
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biolio2009

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

反应程序没有做对,空白样要先加DNS试剂,再加入测试样品酶液,保温30分钟后与样品反应液+DNS的试管,同时在佛水域中显色。这样就绝对没问题了。
3楼2017-03-01 21:25:52
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赵晴之ZQ

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by biolio2009 at 2017-03-01 21:25:52
反应程序没有做对,空白样要先加DNS试剂,再加入测试样品酶液,保温30分钟后与样品反应液+DNS的试管,同时在佛水域中显色。这样就绝对没问题了。

你好,OD值要控制在多少呢?我买的有纤维素酶,生产日期是15年的,瓶子外标上写的酶活(activity,)50000u/g,而我按着NY/T912-2004方法进行纤维素酶活力测定,结果是3400u/g,请问有什么要注意的吗,不知道哪里出问题了
4楼2017-03-02 12:23:53
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Paris朵

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by biolio2009 at 2017-03-01 21:25:52
反应程序没有做对,空白样要先加DNS试剂,再加入测试样品酶液,保温30分钟后与样品反应液+DNS的试管,同时在佛水域中显色。这样就绝对没问题了。

你好,请问先加还是后加DNS对吸光度有什么影响吗?DNS要直接加到样品里边吗?不是应该30分钟反应完毕后加入,然后放进沸水浴的嘛?
5楼2017-11-27 15:16:04
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卡啦啦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by lcmfriend at 2015-12-17 08:54:37
按照NY/T912-2004方法进行纤维素酶活力测定。结果酶空白样的吸光度AB大于酶反应液的吸光度AE,甚至结果都是负的。
不知道问题出在哪?
做了好多次了,结果总是不尽人意。
希望指导!多谢
酶样1、 2 为固体样品 ...

最后做出来了么?

发自小木虫Android客户端
6楼2018-01-09 16:11:04
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Nelly3816

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 赵晴之ZQ at 2017-03-02 12:23:53
你好,OD值要控制在多少呢?我买的有纤维素酶,生产日期是15年的,瓶子外标上写的酶活(activity,)50000u/g,而我按着NY/T912-2004方法进行纤维素酶活力测定,结果是3400u/g,请问有什么要注意的吗,不知道哪里出 ...

你这个测的是内切酶的酶活,人家标的可能是总的纤维素酶酶活

发自小木虫Android客户端
7楼2020-09-07 23:06:04
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