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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量时ct值40以后还没起峰但有溶解曲线 是什么原因？
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achillesyao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

即使目的基因表达量太少，也应该会起峰，不会完全不起，很有可能是引物设计有问题，引物结合不上，或者二聚体。
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11楼2015-08-21 15:32:27
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fallout76

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
12楼2015-09-07 15:48:08
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GJT0427gjt

新虫 (初入文坛)
以我做实时定量的经验，你应该验证一下这对引物的特异性，引物特异性不好，溶解曲线也不好。你的循环应该设置在45个左右。也有可能加错样了，但是平行对照都不起峰的话，应该是引物的问题
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13楼2015-09-12 20:10:42
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凡人凡语1

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般34没出来，就已经没戏了，你的溶解曲线可能是因为引物二聚体一类引起的
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14楼2015-09-20 22:23:22
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workhoic

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可能是引物二聚体，你可以跑下电泳，看看条带大小
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相信自己是获得成功的基础！
15楼2015-10-18 22:38:13
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拾玖

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先确定你的目的基因引物没问题   可以先用普通pcr试试  调调温度等条件
  若果引物没问题  你的内参CT在20左右  你的目的基因到40还没出峰  那就是你的目的基因表达量太低了  一般来说就不用做了  如果你的内参CT也比较大 在30左右  那就很有可能是你模板太低 可以把模板提高试试
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16楼2015-10-23 17:39:54
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O.P.C.Spirit

金虫 (初入文坛)

遇见最美的她
引物二聚物
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读史使人明智，研究是人睿智。
17楼2015-12-07 11:20:17
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LXD_0001

银虫 (小有名气)
你的模板浓度是不是太低了点？40ct以后的数据参考性不高。
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幸福是一种能力。。。。。
18楼2016-01-09 09:37:02
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360642352

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

目的基因拷贝数太低。另外，查看下熔解曲线的TM值，
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19楼2016-03-04 22:53:34
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cbw2014

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

目的基因没P出来呗~溶解曲线可能不是目的基因产物，二是非特异性扩增产物，如引物二聚体等。
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20楼2017-02-23 11:14:55
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