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achillesyao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

即使目的基因表达量太少,也应该会起峰,不会完全不起,很有可能是引物设计有问题,引物结合不上,或者二聚体。
11楼2015-08-21 15:32:27
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fallout76

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

12楼2015-09-07 15:48:08
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GJT0427gjt

新虫 (初入文坛)

以我做实时定量的经验,你应该验证一下这对引物的特异性,引物特异性不好,溶解曲线也不好。你的循环应该设置在45个左右。也有可能加错样了,但是平行对照都不起峰的话,应该是引物的问题
13楼2015-09-12 20:10:42
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凡人凡语1

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般34没出来,就已经没戏了,你的溶解曲线可能是因为引物二聚体一类引起的
14楼2015-09-20 22:23:22
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workhoic

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可能是引物二聚体,你可以跑下电泳,看看条带大小
相信自己是获得成功的基础!
15楼2015-10-18 22:38:13
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拾玖

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

首先确定你的目的基因引物没问题   可以先用普通pcr试试  调调温度等条件
  若果引物没问题  你的内参CT在20左右  你的目的基因到40还没出峰  那就是你的目的基因表达量太低了  一般来说就不用做了  如果你的内参CT也比较大 在30左右  那就很有可能是你模板太低 可以把模板提高试试
16楼2015-10-23 17:39:54
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O.P.C.Spirit

金虫 (初入文坛)

遇见最美的她

引物二聚物
读史使人明智,研究是人睿智。
17楼2015-12-07 11:20:17
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LXD_0001

银虫 (小有名气)

你的模板浓度是不是太低了点?40ct以后的数据参考性不高。
幸福是一种能力。。。。。
18楼2016-01-09 09:37:02
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360642352

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

目的基因拷贝数太低。另外,查看下熔解曲线的TM值,
19楼2016-03-04 22:53:34
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cbw2014

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

目的基因没P出来呗~溶解曲线可能不是目的基因产物,二是非特异性扩增产物,如引物二聚体等。
20楼2017-02-23 11:14:55
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