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miclebibi

银虫 (小有名气)

引用回帖:
40楼: Originally posted by 悠悠米 at 2014-09-26 12:19:07
楼主,我最近连1771bp的条带,平端连,载体酶切、补平、去磷酸化处理,T4 ligase连接16℃大概12h,做了两批,PCR、酶切都没有阳性克隆 ,能帮我分析一下原因吗

载体和片段的比例是多少
41楼2014-10-02 08:56:33
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悠悠米

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
41楼: Originally posted by miclebibi at 2014-10-02 08:56:33
载体和片段的比例是多少...

1:10
42楼2014-10-07 20:29:36
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miclebibi

银虫 (小有名气)

引用回帖:
42楼: Originally posted by 悠悠米 at 2014-10-07 20:29:36
1:10...

片段太多了,推荐一比三,另外用pUC18做一个对照,有可能感受态的问题,TA克隆一般不会连不上的
43楼2014-10-08 08:25:06
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czdaeq

木虫 (著名写手)

送红花一朵
for fun!
44楼2014-10-08 10:23:34
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谢谢分享
45楼2014-10-13 10:06:32
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谢谢分享!
46楼2014-11-04 11:06:23
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情毒之殇

金虫 (正式写手)

送红花一朵
感觉很有用
我们的心是荒野还是沃土?!
47楼2015-06-23 18:32:49
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liulingjun15

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
唉,最近在做一个4500bp的CDNA,怎么都构不成,T载都连不上,用楼主的方法试试分段连接
48楼2015-07-10 17:26:42
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cong.peiqian

金虫 (正式写手)

小研


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问您有没有做过,毒性蛋白的基因克隆
不信天不信地,只信自己。
49楼2015-08-27 20:17:46
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奋进的女孩

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主能不能分享下软件啊?

[ 发自小木虫客户端 ]
50楼2015-08-27 23:55:32
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