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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 请问做WB时羊抗鼠二抗的稀释比例一般是多少呀？
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玉雪晴儿

银虫 (正式写手)

[求助] 请问做WB时羊抗鼠二抗的稀释比例一般是多少呀？已有5人参与

买的是HRP-Goat-Anti-Mouse IgG (H+L) 626520，说明书上只推荐了ELISA的稀释比例1：:2000-1:4000，但是没有推荐用于WB时的稀释比例，做了一次WB，稀释按1：2000，但是背景太重了，效果很不好，请问有没有用过这个同产品的二抗的虫子呀，希望给点建议呀！多谢啦！
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沿着既定的方向，前进
1楼2014-07-30 11:58:46
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader

【答案】应助回帖

★ ★
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玉雪晴儿(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-30 14:33:08
没用过国产的，但二抗一般至少可以稀释1：5000，对大多数WB来说，可以在1：5000～1：10000间尝试，然后根据结果做些调整。

你的情况二抗可能是个主要原因，但也可能与一抗的好坏、温育时间，特别是细膜或开始的block等多个因素相关。
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2楼2014-07-30 12:14:00
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
玉雪晴儿(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-30 14:33:19
一般是1：2000，背景深原因很多，可4°封闭过夜，洗膜的时候多洗几遍，尝试1:4000试试
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3楼2014-07-30 13:19:35
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-08-01 17:35:13
可以先做预实验，没人能凭空给你定个稀释比例。
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年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折！交流锤炼知识，用心构筑桥梁，以更优质的产品及技术服务助力科研；QQ：2513165427；Email：b
4楼2014-08-01 17:28:56
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usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般用的是Abcam的羊抗鼠，浓度是1:10000，稀释于含有3%牛奶的PBST溶液，效果一直都不错

你的这个比例是太重了，至少也应该1:5000起吧。
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下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
5楼2014-08-01 18:23:04
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陌路行客

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们实验室二抗一般是1：5000稀释的，如果说背景过重，也不一定是你1：2000的稀释导致的，你的膜有没有封闭充分，或是处理过程中，把膜弄脏了也可能导致高背景的。
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人生中的悲剧太多了
6楼2014-09-25 21:55:04
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