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G+细菌总DNA提取，跑胶是这个样子，急求各位大神看看是什么问题已有1人参与
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提取方法如下：（G+细菌） 1）将培养物室温10,000 rpm离心3 min，弃上清，沉淀重新悬浮于100 μL 1×TE（pH8.0）中； 2）加入10 μL 50 mg/mL的溶菌酶，37oC水浴1 h； 3）加入10% SDS 100 μL，20 mg/mL的蛋白酶K 5 μL，37oC水浴30 min； 4）加入5 mol/L NaCl 100 μL； 5）加入等体积的酚:氯仿:异戊醇（25:24:1），颠倒混匀，室温静置5 min，12,000 rpm离心10 min，将上清液转移至干净的离心管中； 6）加入等体积氯仿:异戊醇（24:1），室温静置5 min，12,000 rpm离心10 min，转移上清液至干净的离心管中； 7）加入0.6倍体积的异丙醇，颠倒混匀，室温静置10 min，12,000 rpm离心10 min，弃上清； 8）加入1 mL 75%乙醇洗涤沉淀，12,000 rpm离心5 min，弃上清；重复洗涤2次； 9）开盖晾干，加入50μl ddH2O或TE溶液溶解DNA，-20oC保存。 提取完毕后，直接用1%的琼脂糖胶看结果，胶图很诡异，Marker最上面那一条是5000 bp，5000 bp上面的应该是基因组DNA；那两条特别亮的大约1500和1000的样子，1500上方还有两条很弱的带，请各位大神看看到底哪里出了问题，这样的提取结果太诡异了！！  dna.jpg |
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biostar2009
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谁说提RNA非要那么费劲了？酒精对保护RNA有效果么？抽个RNA本来就是个很放松的事情。 加点RNaseA，第一步把菌悬起来的时候就可以加，浓度可以参考抽质粒的buffer，如果还是不行，在最后一步溶解DNA的时候可以再加。浓度可以更高一点。 因为你这个分离程序，本质上说，是核酸的分离程序，并不针对RNA还是DNA，所以有RNA污染几乎是必然。 同时需要看你下一步的用途，如果仅仅是做个模板搞PCR，就这样就可以了，因为RNaseA切断的RNA也不会切成NTP，旺旺都是100 nt左右大小的碎片，如果你要去除，还得想办法，最好是柱纯化，或者LiCL沉淀。 |
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wangniancug
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