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belina张

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质的存在会对多糖含量的测定产生影响吗

蛋白质的存在会对多糖含量的测定有影响吗
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沙伯略

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果是用苯酚法测定多糖含量的话,基本不受蛋白质的影响。因为其测定原理是:多糖在浓硫酸作用下,脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物,在10-100mg/ml范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且在485nm波长下有最大吸收,因而可用比色法在此波长下测定。
向前出发,永远向前!
3楼2013-10-09 12:26:02
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mingge

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
belina张: 金币+5, 有帮助 2013-10-10 09:04:48
看你用什么方法检测了。最好是先前处理一下,比如使用SPE或者沉淀过滤等。
Q1454596160
2楼2013-10-09 11:29:36
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沙伯略

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引用回帖:
4楼: Originally posted by belina张 at 2013-10-10 09:12:09
谢谢了。我使用的是间羟基联苯法测多糖中糖醛酸的含量,不知这个方法受蛋白质的影响大吗?如果使用硅胶薄层板来鉴别糖醛酸的种类时,蛋白质会有影响吗?...

蛋白质的存在会有一定的影响,参见《对羟基联苯法定量测定发酵液中的乳酸》。。。
向前出发,永远向前!
5楼2013-10-10 20:52:00
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belina张

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 沙伯略 at 2013-10-09 12:26:02
如果是用苯酚法测定多糖含量的话,基本不受蛋白质的影响。因为其测定原理是:多糖在浓硫酸作用下,脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物,在10-100mg/ml范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且 ...

谢谢了。我使用的是间羟基联苯法测多糖中糖醛酸的含量,不知这个方法受蛋白质的影响大吗?如果使用硅胶薄层板来鉴别糖醛酸的种类时,蛋白质会有影响吗?
4楼2013-10-10 09:12:09
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志存高远888

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 沙伯略 at 2013-10-09 12:26:02
如果是用苯酚法测定多糖含量的话,基本不受蛋白质的影响。因为其测定原理是:多糖在浓硫酸作用下,脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物,在10-100mg/ml范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且 ...

您好,想问问您,我测定多糖含量时,是先热水浸提,然后离心取上清液,测定体积,苯酚硫酸法测定的多糖含量,得到得率在9%左右,但是我要是醇沉后,沉淀水溶再测定的话,得率就是1%左右,想问问那种方法靠谱啊?为什么差别这么大啊?
Where there is a will,there is a way.
6楼2014-08-18 20:51:46
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沙伯略

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引用回帖:
6楼: Originally posted by 志存高远888 at 2014-08-18 20:51:46
您好,想问问您,我测定多糖含量时,是先热水浸提,然后离心取上清液,测定体积,苯酚硫酸法测定的多糖含量,得到得率在9%左右,但是我要是醇沉后,沉淀水溶再测定的话,得率就是1%左右,想问问那种方法靠谱啊?为 ...

醇沉最终醇浓度多大呢?测含量的话就别用醇沉了吧,否则少部分水也会溶解相当一部分多糖。
向前出发,永远向前!
7楼2014-08-18 23:18:34
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志存高远888

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 沙伯略 at 2014-08-18 23:18:34
醇沉最终醇浓度多大呢?测含量的话就别用醇沉了吧,否则少部分水也会溶解相当一部分多糖。...

最终浓度不一定,我直接加的上清液的3倍体积的95%乙醇,如果不醇沉,测得含量特别不准,单因素曲线忽上忽下,现在还没有找到原因。望给予指导,谢谢啦~
Where there is a will,there is a way.
8楼2014-08-19 19:34:04
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吴月芽2009

银虫 (小有名气)

首先,1、提取物直接测多糖,吸光值偏高。这个误差不大。
2、醇沉粗多糖约占水提物多糖一半。
3、看你的操作,主要多糖未完全醇沉。
改进的操作:上清液要浓缩,测固形物6%左右,加乙醇后,整个溶液的乙醇浓度要在80%以上。你的操作,醇浓度偏低,无法完全析出,若上清液体积不大不便浓缩,可以直接加热蒸发部分水分,或者加入1:5乙醇。
9楼2014-08-26 10:52:47
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ilovesf

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 志存高远888 at 2014-08-18 20:51:46
您好,想问问您,我测定多糖含量时,是先热水浸提,然后离心取上清液,测定体积,苯酚硫酸法测定的多糖含量,得到得率在9%左右,但是我要是醇沉后,沉淀水溶再测定的话,得率就是1%左右,想问问那种方法靠谱啊?为 ...

您好!问一下你醇沉后的多糖水溶好溶解吗?醇沉后的多糖你有没有经过干燥?为什么我将粗多糖完全干燥了之后想测含量的时候很难溶了呢?
静以修身
10楼2015-05-08 23:27:23
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