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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC柱前衍生测定氨基酸含量标准品出现两个高度相关峰
【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)

[交流] HPLC柱前衍生测定氨基酸含量标准品出现两个高度相关峰已有2人参与

氨基酸标准品衍生后出现两个峰。高效液相测定氨基酸含量，用OPA柱前衍生，发现每一种氨基酸标准品均会出现两个峰，高度相关，而且峰面积都比较大，无法一起种之一定量，求助个无虫友，有没有遇见过这种情况，大家是怎么解决的。
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1楼2012-06-01 18:02:08
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研创手性科技

新虫 (初入文坛)
衍生剂的可能性会大点，如果排除了，会不会是肩峰？
实在找不到原因的话，难道是D型与L型让大姐您分开了？
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10楼2012-06-11 11:40:53
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普通回帖

沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
谢谢机器人
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2楼2012-06-02 18:00:31
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
怎么没人关注一下啊，各位大侠？拜托了
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3楼2012-06-04 21:51:31
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hezhao999

木虫 (正式写手)
衍生剂和氨基酸的峰？
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4楼2012-06-04 22:15:14
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
不是啊，相关性极高而且在衍生剂加入量一定的情况下二者同时增大或者减小。另外每一种都是两个峰
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5楼2012-06-05 19:39:32
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
关注一下吧虫友们？做过氨基酸酸的帮帮忙吧，小女子先行拜谢了
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6楼2012-06-07 22:26:14
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
还是没有人？小木虫是怎么了
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7楼2012-06-08 18:54:12
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vetszh1181

银虫 (小有名气)
你有没有做溶剂空白衍生对照啊？每一种都有两个峰，他们的保留时间都不一样吗？
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8楼2012-06-10 20:28:29
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by vetszh1181 at 2012-06-10 20:28:29
你有没有做溶剂空白衍生对照啊？每一种都有两个峰，他们的保留时间都不一样吗？

空白的没有。每种都有两个，保留时间也不同啊。不知道是什么原因啊，能否提示一二不胜感激
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9楼2012-06-10 22:16:51
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vetszh1181

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 沙漠之舟0612 at 2012-06-10 22:16:51
空白的没有。每种都有两个，保留时间也不同啊。不知道是什么原因啊，能否提示一二不胜感激...

那就做一下试剂空白衍生对照
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11楼2012-06-11 17:01:15
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兜圈儿

铜虫 (小有名气)
记得我以前用过opa做柱后衍生。标品污染了吗？要不你重新配个标品试试？用opa衍生要控制时间，温度啊，你确定你的温度没有破坏标品吗？
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12楼2012-06-13 12:21:43
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 兜圈儿 at 2012-06-13 12:21:43
记得我以前用过opa做柱后衍生。标品污染了吗？要不你重新配个标品试试？用opa衍生要控制时间，温度啊，你确定你的温度没有破坏标品吗？

俺想问问你是什么温度做得我就是室温啊
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13楼2012-06-16 19:37:29
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 研创手性科技 at 2012-06-11 11:40:53
衍生剂的可能性会大点，如果排除了，会不会是肩峰？
实在找不到原因的话，难道是D型与L型让大姐您分开了？

实在不敢当啊，手性的俺肯定是分不开大的。肩峰的话保留时间也不会差三分钟。我现在想是不是副产物，了解这方面吗？阁下？
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14楼2012-06-16 19:41:06
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by vetszh1181 at 2012-06-11 17:01:15
那就做一下试剂空白衍生对照...

做过空白了，没有那种峰的
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15楼2012-06-16 19:42:10
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皮卡丘olive

新虫 (初入文坛)
你到仪器信息网上查查，那里有很多做液相的帖子，我记得那上面有说过。有的是，进样量过载，或其他问题。
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16楼2012-07-02 10:59:17
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梓夜

新虫 (初入文坛)
我也在做氨基酸衍生，我现在也出现了一个很棘手的问题：现在出的峰都分不开，好多肩峰，跟波浪一样，前两个星期还做的好好地，峰型很漂亮。我查了一下流动相没问题，标样没问题，昨天还洗了24小时的柱子，以为柱子污染了，但今天进了几针标样还是一样的，好难看的峰！
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17楼2012-10-18 15:22:01
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巧克力520

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 研创手性科技 at 2012-06-11 11:40:53
衍生剂的可能性会大点，如果排除了，会不会是肩峰？
实在找不到原因的话，难道是D型与L型让大姐您分开了？

D、L分开了？？？跪求大姐的具体操作方法！！！
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18楼2012-11-20 10:20:34
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 梓夜 at 2012-10-18 15:22:01
我也在做氨基酸衍生，我现在也出现了一个很棘手的问题：现在出的峰都分不开，好多肩峰，跟波浪一样，前两个星期还做的好好地，峰型很漂亮。我查了一下流动相没问题，标样没问题，昨天还洗了24小时的柱子，以为柱子污 ...

我出现过这种情况，前期峰型十分好，实验室停过一次电，当时没办法只能靠储备电匆忙的冲柱子，结果相同条件下，以后出现的峰都有点前沿峰。这里我可以让你看看对比。
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19楼2012-11-22 18:10:42
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
我的问题是解决了的。总结如下：OPA衍生剂在夏天使用时，随之配制时间延长，会逐渐使氨基酸衍生物的副产物含量增加，也就是同一个氨基酸衍生可能检测到2种以上，很明显就是两个以上的峰，高度相关，如果起初的分离条件良好，峰形良好，那么副产物的峰型也挺好，有的时候会觉得有其他成就感，这么漂亮的氨基酸衍生峰。
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20楼2012-11-22 18:14:50
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
我的实验做完了。但是欢迎虫友们继续讨论啊，学无止境嘛，我自己对摸索实验条件之类的非常感兴趣，一下上传几张图，嘿嘿，水平就这样，不过自己说得过去，也许对初做氨基酸的虫友有帮助。另外，期待其他做过的虫友的批评指正啊
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21楼2012-11-22 18:19:04
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
嘿嘿，不好意思啊各位，不是前沿峰，是拖尾峰，小女子在这里更正啦。分离效果也变差了。
第一张是几个标准品。
第二张也是标准品的图，前两个是主峰，后面两个分别是前两个的附属峰。
第三张是停电后，相同条件下，拖尾峰，我尝试了很多方法，都没有调节过来，怀疑和柱子有关系，而且做内源性氨基酸一定要舍得冲柱子，否则，柱效变化很明显的。（期待，有大侠帮小女子分析一下第三张前沿峰的问题哦。）

小木虫标品.jpg



副产物.jpg



拖尾峰.jpg
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22楼2012-11-22 18:32:09
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sunpu

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 沙漠之舟0612 at 2012-11-22 18:14:50
我的问题是解决了的。总结如下：OPA衍生剂在夏天使用时，随之配制时间延长，会逐渐使氨基酸衍生物的副产物含量增加，也就是同一个氨基酸衍生可能检测到2种以上，很明显就是两个以上的峰，高度相关，如果起初的分离条 ...

是这样的，有文献阐述了氨基酸和OPA确实可能会产生不止一种衍生产物，有兴趣可以给你看看，几乎所有的氨基酸都是这样。但据我实验的结果，冬天照样会观察到这种现象。
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23楼2013-04-02 16:05:45
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sunpu

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 沙漠之舟0612 at 2012-11-22 18:14:50
我的问题是解决了的。总结如下：OPA衍生剂在夏天使用时，随之配制时间延长，会逐渐使氨基酸衍生物的副产物含量增加，也就是同一个氨基酸衍生可能检测到2种以上，很明显就是两个以上的峰，高度相关，如果起初的分离条 ...

是这样的，有文献阐述了氨基酸和OPA确实可能会产生不止一种衍生产物，有兴趣可以给你看看，几乎所有的氨基酸都是这样。但据我实验的结果，冬天照样会观察到这种现象。
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24楼2013-04-02 16:05:52
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sunpu

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 沙漠之舟0612 at 2012-11-22 18:14:50
我的问题是解决了的。总结如下：OPA衍生剂在夏天使用时，随之配制时间延长，会逐渐使氨基酸衍生物的副产物含量增加，也就是同一个氨基酸衍生可能检测到2种以上，很明显就是两个以上的峰，高度相关，如果起初的分离条 ...

是这样的，有文献阐述了氨基酸和OPA确实可能会产生不止一种衍生产物，有兴趣可以给你看看，几乎所有的氨基酸都是这样。但据我实验的结果，冬天照样会观察到这种现象。
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25楼2013-04-02 16:10:58
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wangdanwei

新虫 (初入文坛)
请问楼主，我也遇到了同样的问题，请问楼主是怎么解决的？
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26楼2013-12-18 20:19:27
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by wangdanwei at 2013-12-18 20:19:27
请问楼主，我也遇到了同样的问题，请问楼主是怎么解决的？

亲，你这是问问题，还说是应助贴。严格控制衍生剂制备时间，最高超过12h不再用了，你试试，基本就可以解决了
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27楼2013-12-21 15:11:42
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wangdanwei

新虫 (初入文坛)
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27楼: Originally posted by 沙漠之舟0612 at 2013-12-21 15:11:42
亲，你这是问问题，还说是应助贴。严格控制衍生剂制备时间，最高超过12h不再用了，你试试，基本就可以解决了...

好的，谢谢~~~
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28楼2013-12-23 09:59:46
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chenbaolong

新虫 (初入文坛)
我也出现这种情况，比较郁闷！我的两个峰保留时间差不多。而且我做了空白的不出峰，同求！！！！
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29楼2014-04-24 22:31:51
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
空白为什么会出峰？
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30楼2014-04-25 09:21:30
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眼圈西施熊

新虫 (初入文坛)
什么衍生剂，我用的2,4-二硝基氟苯。用水代替氨基酸，加入衍生剂，其余条件一样，单打衍生剂的空白对照。两个峰应该是氨基酸衍生物和多余的衍生剂
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31楼2014-10-15 11:45:02
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不爱叫外卖

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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20楼: Originally posted by 沙漠之舟0612 at 2012-11-22 18:14:50
我的问题是解决了的。总结如下：OPA衍生剂在夏天使用时，随之配制时间延长，会逐渐使氨基酸衍生物的副产物含量增加，也就是同一个氨基酸衍生可能检测到2种以上，很明显就是两个以上的峰，高度相关，如果起初的分离条 ...

楼主，请问衍生物一般是在衍生剂前出峰还是衍生剂后出峰？
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32楼2014-11-05 11:22:57
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沙漠之舟0612

金虫 (小有名气)
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32楼: Originally posted by 不爱叫外卖 at 2014-11-05 11:22:57
楼主，请问衍生物一般是在衍生剂前出峰还是衍生剂后出峰？...

和你选择的衍生剂有关。我的衍生剂在色谱条件下没有峰。当时只是二级衍生物在主要衍生物的后面出峰
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33楼2014-11-05 11:55:31
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不爱叫外卖

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
33楼: Originally posted by 沙漠之舟0612 at 2014-11-05 11:55:31
和你选择的衍生剂有关。我的衍生剂在色谱条件下没有峰。当时只是二级衍生物在主要衍生物的后面出峰...

我用的是异硫氰酸苯酯，用空白样加衍生剂做了定为，我的图谱中衍生剂出峰位置在35min前后，衍生后的氨基酸图谱中35min前后有峰，在38min前后也有一个峰，相比35min的小，38min的是不是能确定为是衍生物？
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34楼2014-11-05 13:13:47
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lsdeel

木虫 (初入文坛)
★
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现在遇到了同样的问题啊。。。
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35楼2015-05-13 20:46:41
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chenlanludan

新虫 (初入文坛)
★
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衍生化的原理就是一个简单的合成反应，是合成反应就必然会有副产物生成。我也在做衍生化，你得看看你的化合物的结构，是不是有反应基团有好几个，只是活性不同而已。
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36楼2015-09-01 11:25:18
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兜兜兜兜

木虫 (正式写手)
★
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楼主您好！我最近也在做OPA衍生测谷氨酸，线性不是好，只有一个9，不知道楼主有没有遇到过，有没有什么好的建议，先谢过了
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37楼2016-10-28 16:07:10
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玻璃里的影

新虫 (初入文坛)
★
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9楼: Originally posted by 沙漠之舟0612 at 2012-06-10 22:16:51
空白的没有。每种都有两个，保留时间也不同啊。不知道是什么原因啊，能否提示一二不胜感激...

我最近也在做，也是出现这种情况
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38楼2017-05-02 21:42:58
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243032013

铜虫 (小有名气)
★
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新开一瓶衍生试剂试试，实在不行再换跟柱子

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39楼2017-05-06 09:10:04
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sunely

新虫 (初入文坛)
★
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想问问各位大神，我也用OPA衍生氨基酸，GABA有峰能检测到，Glu什么都没有只有溶剂峰是怎么回事

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40楼2018-01-17 22:42:03
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543669145

铁虫 (初入文坛)
★
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27楼: Originally posted by 沙漠之舟0612 at 2013-12-21 15:11:42
亲，你这是问问题，还说是应助贴。严格控制衍生剂制备时间，最高超过12h不再用了，你试试，基本就可以解决了...

邻苯二醛（OPA）和9-芴甲基氯甲酸甲酯（FMOC）衍生剂都挺贵的，12小时候就不能用了？
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41楼2018-03-17 23:34:39
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543669145

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
32楼: Originally posted by 不爱叫外卖 at 2014-11-05 11:22:57
楼主，请问衍生物一般是在衍生剂前出峰还是衍生剂后出峰？...

楼主，请问衍生物一般是在衍生剂前出峰还是衍生剂后出峰？你糊涂了吧
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42楼2018-03-17 23:35:45
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叶与云

新虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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31楼: Originally posted by 眼圈西施熊 at 2014-10-15 11:45:02
什么衍生剂，我用的2,4-二硝基氟苯。用水代替氨基酸，加入衍生剂，其余条件一样，单打衍生剂的空白对照。两个峰应该是氨基酸衍生物和多余的衍生剂

请问一下用DNFB做，效果好吗？
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43楼2018-12-17 13:52:34
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gwmgyp

版主 (知名作家)
★
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如果排除了其它虫子的初步判断，那么只有可能是溶剂效应了，先问下样品的溶剂是什么？流动相是啥？
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44楼2018-12-17 14:43:05
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