| 查看: 1864 | 回复: 1 | ||
[求助]
翻译--论文翻译求助---撰写主题
|
|
类风湿性关节炎脾虚证病证结合动物模型的建立* 杜中平，赵宏艳，肖诚，刘梅洁，王燕，吕诚，吕爱平，王少君，滕静如，鞠大宏△ 杜中平 赵宏艳（中国中医科学院中医基础理论研究所 北京 100700） 肖诚（中日友好医院临床医学研究所 北京 100029） 刘梅洁（中国中医科学院中医基础理论研究所 北京 100700） 王燕（民航总医院病理科 100123） 吕诚 吕爱平（中国中医科学院中医临床基础医学研究所 北京 100700） 王少君 滕静如 鞠大宏**（中国中医科学院中医基础理论研究所 北京 100700） 目的：类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）脾虚证病证结合动物模型的建立。 方法：选用6周龄SPF级SD大鼠，雌雄各半，除正常对照组大鼠外，采用腹腔注射利血平的方法制作脾虚动物模型，然后采用尾根部皮下注射Ⅱ型胶原与不完全弗氏佐剂混合物的方法诱导出关节炎模型，通过对大鼠行为学指标、关节炎指数、关节肿胀度、血浆抗Ⅱ型胶原抗体、白细胞介素（Interleukin, IL）-6、IL-10、干扰素（Interferon, IFN）-γ含量测定、外周血T淋巴细胞亚群、脾淋巴细胞增殖及回肠病理改变，观察脾虚证RA病证结合动物模型的发病情况，并采用酶联免疫吸附测定法等方法对其机理进行初步探讨。 结果：与CIA对照组大鼠相比，采用腹腔注射利血平的方法制作的脾虚证胶原诱导性关节炎（Collagen-induced arthritis，CIA）大鼠关节红肿程度和关节损伤程度明显加重，并且脾虚证CIA组大鼠出现精神萎靡、眯眼、被毛枯疏无光泽、弓背蜷缩、踝关节红肿、倦怠、懒动、喜聚堆、饮食减少、体重下降、稀便等与临床脾虚证相似的症状；与CIA对照组大鼠相比，脾虚证小肠黏膜功能受损：绒毛排列紊乱，数量减少，长短、宽窄不一，被覆上皮可见有多量杯状细胞，肠腔内可见多量剥脱、退变、坏死的绒毛碎片；与CIA对照组大鼠相比，脾虚证CIA大鼠抗Ⅱ型胶原抗体明显升高，且IL-6、IL-10及IFN-γ水平明显升高。 结论：脾虚在RA发病过程中起着重要作用，采用利血平方法制作的脾虚证RA动物模型，既有明显的脾虚症状，又有明显的RA特征，说明这种脾虚证RA病证结合模型，能够部份反映脾虚证RA病人的发病特点，具有可行性。利血平法制作的脾虚证CIA大鼠模型可以为RA脾虚证病证结合动物模型提供一个有益的参考。 关键词：类风湿性关节炎；病证结合动物模型；脾虚证 Establishment of a rat rheumatoid arthritis model with spleen deficiency syndrome Zhong-ping DU1, Cheng XIAO2, Hong-yan ZHAO1, Mei-jie LIU1, Yan WANG3, Cheng LV4, Ai-ping LV4, Shao-jun WANG1, Jing-ru TENG1, Da-hong JU1△ 1. Institute of Basic Theory of Chinese Medicine, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China 2. Institute of Clinical Medicine, China-Japan Friendship Hospital, Beijing 100029, China 3. Department of Pathology, Civil Aviation General Hospital, Beijing 100123, China 4. Institute of Basic Research in Clinical Medicine, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China Objective：To establish a rat rheumatoid arthritis model with spleen deficiency syndrome.. Methods: Six-week-old Sprague-Dawley rats were randomly divided into normal control group CIA group and Reserpine（RSP）+CIA group. Spleen deficiency rat model were made by intraperitoneal injection of reserpine.Then rats of CIA group and RSP+CIA group were subcutaneously injected with Ⅱcollagen to induce rheumatoid arthritis (Collagen-induced arthritis , CIA). Observe the incidence and analyze the potential mechanism by enzyme-linked immunosorbent assay between CIA group and RSP+CIA group. Results: Compared with the CIA group, the degree of joint swelling and joint damage was significantly increased in the RSP+CIA group. The symptom of RSP+CIA rats were similar to RA patients with spleen deficiency syndrome, such as appeared apathetic, squinting, sparse dry dull coat, bowed back, ankle swelling, fatigue, lazy move, get together, eating less, weight loss, loose stools. Compared with the CIA rats, there were much changes in the intestinal mucosa of RSP+CIA rats, such as the disorders and decrease of villi, the amount of goblet cells in epithelium and large amounts of exfoliation, degeneration, necrosis fluff pieces in the enteric cavity. The level of Anti-type Ⅱ collagen antibody, IL-6, IL-10 and IFN-γin RSP+CIA rats was increased. Conclusion: Spleen deficiency play an vital role in the rheumatoid arthritis. The rat rheumatoid arthritis model with spleen deficiency syndrome by intraperitoneal injection of reserpine has both obvious spleen deficiency syndrome and character of RA. It can provide a successful experiences for rat rheumatoid arthritis model with spleen deficiency syndrome. Keywords: Rheumatoid arthritis；Disease-syndrome combination rat model；Spleen deficiency syndrome 类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一种病因尚未明了的慢性全身性炎症性疾病，以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现，属于自身免疫炎性疾病，属中医学“痹证”范畴。即往的研究成果表明[1-3]，肾虚在RA发生发展中有着重要的作用，但有许多研究表明脾虚与RA的中医病机、临床表现亦密切相关。中医学认为脾胃虚弱，饮食失调，起居失常，可致痰湿内生，湿浊为患，复感外邪而致痹，如《素问•痹论篇第四十三》指出：“饮食居处为其病本。从脾论治作亦是中医药治疗RA的重要法则，不但取得了明显的临床疗效，而且具有一定的实验基础。因此本实验在即往的研究成果，及我们前期的工作基础上[4]，开展了脾虚证类风湿性关节炎动物模型的建立与评价方法的部分研究工作。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 动物 选用6周龄SPF级SD大鼠60只，雌雄各半，由中国药品生物制品检定所提供[动物许可证号：SCXK（京）2005-0004]。在中国中医科学院基础理论研究所清洁级动物室喂养，实验动物室许可证号：SYXK（京）2005-0024。 1.1.2 主要试剂与仪器 1.1.2.1 主要试剂：牛Ⅱ型胶原（批号：100028）、不完全弗氏佐剂（批号：100106）、大鼠抗牛Ⅱ型胶原试剂盒（批号：121109）：均为美国Chondrex公司产品；大鼠白细胞介素（IL）-6试剂盒（批号：49542016）、IL-10 试剂盒（批号：49611006）、大鼠干扰素（IFN）-γ试剂盒（批号：48768013）：均为美国Bender公司产品；大鼠皮质酮（Corticosterone，CORT）试剂盒（批号：61k059）：德国DRG公司产品；细胞增殖检测试剂盒（批号：40501）：美国BioVision公司产品；FITC anti-rat CD3（批号：B126921）、PE anti-rat CD4（B124011） 、PerCP anti-rat CD8a（B134493）：美国BioLegend公司产品；利血平针剂：广东邦民制药厂。 1.1.2.2 主要仪器：Leica DM6000B 生物显微镜：德国Leica公司产品；AS325型切片机：英国Shondon公司产品；T10 BASIC手持式分散机：德国IKA公司产品；Multiskan Mk3酶标仪、Wellwash 4 Mk2洗板机：美国Thermo公司；MSC1.2超净工作台：美国Thermo公司产品；RKI-100-B CO2孵箱：美国Kendro公司产品；EPICS XL型流式细胞仪：美国Beckman Coulter公司产品；YLS-7B型足趾容积测量仪：山东省医学科学院设备站产品。 1.2 方法 1.2.1 动物分组及处理 适应性喂养1周后，随机分为以下3组：正常对照组、CIA对照组、利血平CIA组。CIA组：取适量牛Ⅱ型胶原溶液（浓度为2 mg/ml）逐滴加入至等容积的不完全弗氏佐剂中，牛Ⅱ型胶原终浓度为1 mg/ml。冰浴中用匀浆器充分乳化，以滴入水中不扩散为度，取乳化后的混合物按0.2 ml /只，即200μg 牛Ⅱ型胶原/只，于尾根部皮下注射。7d后按0.1 ml /只，即100μg 牛Ⅱ型胶原/只，于尾根部皮下加强免疫一次利血平CIA组：大鼠给予利血平（0.5 mg•kg-1•d-1）腹腔注射[4]，14 d后，按上述方法进行CIA模型复制。 为了保证免疫条件的齐同性，各组均在同一时间免疫。即以免疫时间为基准点，在免疫前14 d腹腔注射利血平。II型胶原免疫18 d后，从每组筛选出20只关节炎指数≥1分大鼠，即剔除未发病的大鼠，连续观察4周，对比观察复加脾虚证候因素后，CIA大鼠的关节肿胀及相关指标的改变情况。 1.2.2 取材 戊巴比妥钠麻醉下，采用腹主动脉取血，2500 r/min，20 min离心后取血浆，分装后，-80℃冰冻备用。取双侧膝、踝关节及回肠，在福尔马林固定备用。 1.2.3指标的测定 （1）行为学指标观察：根据经典中医理论及当前证候规范化研究成果及大鼠的生物学特性，大鼠一般状态主要观测其体重、被毛状况、活动状况及排便状况等。 （2）关节炎指数（Arthritis index，AI）评分方法：参照5级评分法评价[5]，将2只后踝关节的病变程度累计积分，计算出关节炎指数，每个动物最大为8分。 0分：无关节炎；1分：小趾关节轻度肿胀；2分：小趾关节和足跖肿胀；3分：踝关节以下的足爪肿胀；4分：包括踝关节在内全部关节肿胀 （3）关节肿胀度的测量方法：致炎前在大鼠后肢踝关节上方0.5 cm处做出标记，用足趾容积测量仪测量其容积，计算出其关节肿胀度[6]。肿胀度（edema rate， ER）=（Vt-V0）/V0×100%。其中V0表示造模前的容积，Vt表示造模后的容积。 （4）关节切片及光镜下关节破坏半定量分析方法：关节在福尔马林固定1周后，5%HNO3脱钙1周，酒精逐级脱水，二甲苯透明，石蜡包理，切片，常规HE染色。光镜下观察滑膜、软骨、骨的病理改变，并进行关节病理损伤半定量分析[7]。0分：关节结构正常，关节间隙均匀，软骨、骨无损伤，滑膜组织无炎症、增生等；1分：关节结构基本正常，有滑膜增生，血管数量增加，可见少量炎细胞浸润，软骨表层轻度破坏； 2分：关节软骨有明显的侵蚀破坏，血管翳形成，炎细胞浸润明显，无骨破坏，关节间隙基本正常；3分：有大量的血管翳形成，可见广泛的软骨的侵蚀破坏，可见骨破坏，关节结构遭破坏。 （5）血浆抗Ⅱ型胶原抗体、IL-6、IL-10、IFN-γ含量的测定：采用酶联免疫吸附测定法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA），具体步骤按照试剂盒说明书进行。 （6）外周血T淋巴细胞亚群的测定：分别用FITC、PE、PerCP标记的抗大鼠CD3+、CD4+、CD8+单抗，对全血中的淋巴细胞进行免疫荧光染色（用量参照产品说明书），室温下避光反应40 min，之后加入红细胞裂解液2ml，混均，5 min后加入5 ml D-Hank’s，350 g离心5 min洗两遍，加入500 LD-Hank’s，混匀后上流式细胞仪检测。收集4000个细胞用于数据分析。 （7）脾淋巴细胞增殖的检测：无菌取脾制成淋巴细胞悬液，用1640培养液调整脾细胞浓度为2×106/ml，取50 μl 加入96孔板，每只动物脾细胞悬液平行设9个复孔，分为3组，即刀豆球蛋白A（Con A，10μg/ml）组、脂多糖（LPS，4 μg/ml）组和正常对照组，每组3个复孔。然后分别加入50 μl Con A、50 μl LPS和50 μl 1640培养液。于37℃、5%CO2的培养箱中培养。48 h后，每孔加入10 μl WST-1溶液，在培养箱内继续孵育4h，在450nm/630nm波长下，于酶标仪中记录吸光度（OD450nm/630nm）细胞增殖反应以Con A或LPS刺激指数（SI）表示，即实验孔与对照孔吸光度比值。 （8）回肠病理检测：距盲门5cm处取大鼠回肠，福尔马林固定，酒精逐级脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，常规HE染色，光镜下观察小肠绒毛的病理变化。 1.2.4 统计学处理：结果用均数±标准差（ ）表示，采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD法。 2结果 2.1 各组大鼠行为学改变 正常对照组：大鼠精神状态良好，双目有神，反应、活动灵活敏捷，被毛光泽，饮食正常，体重日渐增加。 CIA对照组：大鼠精神状态良好，被毛光泽，饮食正常，踝关节红肿，活动受限。利血平CIA组：大鼠精神萎靡，眯眼，被毛枯疏无光泽，弓背蜷缩，踝关节红肿，倦怠、懒动，喜聚堆，饮食减少，体重下降，稀便。 图1 各组大鼠体重变化（ ， n=10） 注：与正常对照组比较 * P<0.05，** P<0.01；与CIA对照组比较，△ P<0.05，△△ P<0.01。下同。 2.2 各组大鼠关节损伤的变化情况 2.2.1各组大鼠关节肿胀程度的变化 CIA对照组与利血平CIA组大鼠关节肿胀度，与正常对照组相比明显升高（P<0.01）；与CIA对照组相比，利血平CIA组大鼠关节肿胀度亦明显升高（P<0.01，P<0.05）（见图2及附图1～3）。 图2 各组大鼠关节肿胀度（ ， n=10） 2. 2.2各组大鼠膝关节病理变化 光镜下观察结果显示：正常对照组：膝关节结构正常，各关节软骨表面光滑，软骨基质及软骨细胞无退行性变，滑膜组织无增生，骺板整齐，关节腔内干净，关节周围软组织未见异常，关节软骨下骨小梁大小、排列未见异常。CIA对照组、利血平CIA组：关节腔及滑囊均内可见程度不同的滑膜组织增生，滑膜细胞增生呈的乳头状，滑膜组织内见有扩张的血管及新生毛细血管及成纤维细胞，并伴有淋巴细胞侵润。踝关节各跗骨关节软骨的基质及软骨细胞出现不同程度的退行性，严重处软骨坏死剥脱，变性、坏死剥脱的软骨表面，可见由滑膜细胞和毛细血管增生所形成的血管翳，血管翳侵袭到软骨下，可见不同程度的骨破坏；膝关节腔内可见滑膜组织增生，血管翳形成，关节软骨见有不同程度的退行性变及骨质的破坏。 踝、膝关节病理损伤积分结果表明：CIA对照组与利血平CIA组大鼠膝、踝关节病理积分，与正常对照组相比明显升高（P<0.01）。与雄性CIA对照组相比，利血平CIA组大鼠膝关节病理积分明显升高（P<0.05）。踝关节病理积分虽升高，但无统计学意义。与雌性CIA对照组相比，利血平CIA组大鼠膝、踝关节病理积分明显升高（P<0.05，P<0.01）（见图3及附图4～6）。 图3 各组大鼠膝关节、踝关节病理积分（ ， n=10） 2.3各组大鼠血浆抗II型胶原抗体的变化 与正常对照组相比，CIA对照组及利血平CIA组大鼠血浆抗II型胶原抗体含量明显升高（P<0.01）；与CIA对照组相比，利血平CIA组抗II型胶原抗体含量明显升高（P<0.05，P<0.01）（见图4）。 图4 各组大鼠血浆抗II型胶原抗体含量（ ， n=10） 2.4 各组大鼠血浆IL-6含量的变化 与正常对照组相比，CIA对照组及利血平CIA组大鼠血浆IL-6含量明显升高（P<0.01）。利血平CIA组与CIA对照组相比，IL-6含量无显著性差异（见图5）。 图5 各组大鼠血浆IL-6含量（ ， n=10） 2.5各组大鼠血浆IL-10的变化 与正常对照组相比，雄性CIA对照组及利血平CIA组大鼠血浆IL-10含量明显升高（P<0.01）；利血平CIA组IL-10含量，与CIA对照组相比亦明显升高（P<0.01）（见图6）。 图6 各组大鼠血浆IL-10含量（ ， n=10） 2.6各组大鼠血浆IFN-γ的变化 与正常对照组相比，雄性CIA对照组及利血平CIA组大鼠血浆INF-γ含量明显升高（P<0.01）。利血平CIA组INF-γ含量，与CIA对照组相比无显著性差异（见图7）。 图7 各组大鼠血浆INF-γ含量（ ， n=10） 2.7对脾虚指标的影响 2.7.1 各组大鼠外周血T淋巴细胞亚群的变化 雄性CIA对照组大鼠外周血中CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞百分比与正常对照组相比，无显著性差异，但CD4/CD8明显升高（P<0.05）；与CIA组相比，利血平CIA组CD3+细胞、CD4+细胞明显下降（P<0.05），CD8+细胞百分比无明显变化；利血平CIA组与CIA对照组相比，CD4/CD8无明显变化（见图8）。 图8 各组雄性大鼠外周血T淋巴细胞亚群变化（ ， n=5） 雌性CIA对照组大鼠外周血中CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞百分比与正常对照组相比，无显著性差异，但CD4/CD8明显升高（P<0.01）；与正常对照组相比，利血平CIA组CD3+细胞，CD4+细胞和CD4/CD8无明显变化，CD8+细胞百分比明显下降（P<0.05）；与CIA组对照相比，利血平CIA组CD3+细胞、CD4+细胞明显下降（P<0.01），CD8+细胞百分比和CD4/CD8无明显变化（见图9）。 图9 各组雌性大鼠外周血T淋巴细胞亚群变化（ ， n=5） 2.7.2 各组大鼠脾脏淋巴细胞增殖的变化 与正常对照组相比，CIA对照组ConA刺激下的T细胞增殖能力和LPS刺激后B细胞增殖能力明显升高(P<0.01，P<0.05)。与CIA对照组相比，利血平CIA组B细胞增殖能力明显下降(P<0.05)；雄性T细胞增殖能力明显下降(P<0.01，P<0.05) ，雌性增殖能力亦下降，但无统计学意义（见图10）。 图10各组大鼠脾脏淋巴细胞增殖SI的变化（ ， n=5） 2.7.3 各组大鼠回肠的病理改变 光镜下观察结果显示：正常对照组：粘膜绒毛排列整齐，腺体清晰可见，结构正常，被覆上皮完整，其间可见少量杯状细胞。固有层无改变，肠腔干净。CIA对照组：粘膜绒毛排列整齐，腺体清晰可见，结构正常，被覆上皮完整，其间可见少量杯状细胞。粘膜下层可见少量散在淋巴细胞浸润。利血平CIA组：绒毛排列紊乱，数量减少，长短、宽窄不一，被覆上皮可见有多量杯状细胞，肠腔内可见多量剥脱、退变、坏死的绒毛碎片。坏死组织内见有炎细胞浸润，肠腔内可见剥脱。腺体有处萎缩。 大鼠绒毛长度与宽度统计分析结果显示：与正常对照组相比，CIA对照组大鼠绒毛长度与宽度无明显改变；与正常对照组和CIA对照组相比，利血平CIA组大鼠绒毛长度与宽度明显下降(P<0.05，P<0.01) （见图11及附图7～9）。 图11 各组大鼠绒毛长度与宽度的改变（ ， n=10） 3 讨论 胶原诱导性关节炎（Collagen-induced arthritis，CIA）是目前公认的RA的最佳动物模型，特别是在治疗机制及免疫反应有关的研究中，CIA模型的优点将为研究者提供极大帮助，因此我们选用Ⅱ型胶原免疫作为制作RA动物模型的载体因素。在长期的研究中，我们课题组对CIA模型制作积累了丰富的经验，目前在CIA模型的制作方面处于国内领先水平。本实验结果显示，CIA大鼠免疫10d起相继出现踝关节肿胀，行动迟缓、跛行；光镜下观察发现CIA大鼠踝关节有明显的滑膜组织增生，滑膜细胞增生呈的乳头状，滑膜组织内见有扩张的血管及新生毛细血管及成纤维细胞，并伴有淋巴细胞侵润。各关节软骨的基质及软骨细胞出现不同程度的退行性，严重处软骨坏死剥脱，变性、坏死剥脱的软骨表面，可见由滑膜细胞和毛细血管增生所形成的血管翳，血管翳侵袭到软骨下，可见不同程度的骨破坏；膝关节腔内可见滑膜组织增生，血管翳形成，关节软骨见有不同程度的退行性变及骨质的破坏；并且与正常对照组大鼠相比，大鼠血浆抗Ⅱ型胶原抗体、IL-6、IL-10及IFN-γ等炎症因子的水平明显升高，从而反映本实验制作的CIA模型的可靠性，能够满足RA模型的要求。 RA属中医学“痹证”范畴，许多研究表明脾虚与RA的中医病机、临床表现亦密切相关。中医理论认为脾胃虚弱，饮食失调，起居失常，可致痰湿内生，湿浊为患，复感外邪而致痹，如《素问•痹论篇第四十三》指出：“饮食居处为其病本。”明代医家汪蕴谷在《杂症会心录•痹论》中强调补脾土的重要性。从脾论治作亦是中医药治疗RA的重要法则，不但取得了明显的临床疗效，而且具有一定的实验基础[8-9]，故又有人提出“脾虚是痹证的发病之本”[10]。辨证论治，是中医认识疾病和治疗疾病的基本原则，是中医学对疾病的一种特殊的研究和处理方法，也是中医临床的基本特点。而CIA模型是没有联系中医病因病机学说的动物疾病模型，在探索中医辨证论治及评价中药疗效的等问题上存在一定的局限性。目前对于脾虚证RA动物模型的制作与评价研究工作开展的较少，而这部分研究工作对中医证候等方面或有突破作用，在中医药治疗类风湿性关节炎疗效研究的评价或具有重要的作用，因此我们开展此方面的研究。 目前有多种制作脾虚动物模型的方法，如：用泻下法、饮食失节法、耗气破气法、劳倦过度法、过劳加饥饱失常法、劳倦过度加饮食不节法、利血平法等多种方法制作脾虚动物模型[4,11-14]。在众多脾虚造模的方法中，利血平塑造脾虚证模型出现的各种虚弱症状与临床脾虚症状十分相似，且具有条件易控制、模型较稳定之特点，是制备脾虚模型的经典方法之一。本实验应用利血平制作的脾虚证CIA动物模型，除关节明显红肿外，且出现与临床脾虚证RA相似的改变，具体表现在：（1）动物行为学特征：大鼠精神萎靡，眯眼，被毛枯疏无光泽，弓背蜷缩，踝关节红肿，倦怠、懒动，喜聚堆，饮食减少，体重下降，稀便等症状，十分接近中医脾虚证的症状特点，可以作为脾虚证的模型加以使用和研究。（2）现代检测指标印证：①利血平制作的脾虚证CIA大鼠小肠绒毛排列紊乱，数量减少，长短、宽窄不一，被覆上皮可见有多量杯状细胞，肠腔内可见多量剥脱、退变、坏死的绒毛碎片。坏死组织内见有炎细胞浸润，肠腔内可见剥脱；②与正常对照组相比，ConA刺激下CIA组大鼠T细胞增殖能力和LPS刺激后B细胞增殖能较明显升高，说明CIA大鼠细胞免疫与体液免疫明显增强。利血平CIA组大鼠T细胞和B细胞功能功能较CIA大鼠明显下降，虽无统计学意义，可能是由于利血平（脾虚）虽可引起免疫功能的下降，但并不能对抗这种免疫功能亢进的状态；③CIA组大鼠外周血中CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞百分比与正常对照组相比，无显著性差异，但CD4/CD8明显升高；与CIA组相比，利血平CIA组CD3+细胞、CD4+细胞明显下降，CD8+细胞百分比和CD4/CD8无明显变化，可能是由于CIA大鼠机体处于免疫功能的亢进状态，利血平（脾虚）虽可引起免疫功能的下降，但亦不能调整这种免疫功能亢进的状态。这些均与脾虚证特异性病理变化相符合，说明在此CIA大鼠中存在一定的脾虚状态。除此之外，我们还检测了RA的相关指标，结果显示：脾虚证CIA大鼠与对照CIA大鼠相比，关节肿胀度与关节病理损伤程度加重，抗Ⅱ型胶原抗体、IL-10水平升高，这些指标的改变，从一定程度上表明脾虚能加重RA的发生发展，在RA的发生发展中起着重要的作用，这与中医理论与临床观察相符合。 本课题组对利血平制作的脾虚动物模型，已经有一定的研究基础[4,15-17]，发现用利血平制作脾虚动物模型，动物出现了利血平CIA组大鼠精神萎靡，眯眼，被毛枯疏无光泽，弓背蜷缩，倦怠、懒动，喜聚堆，食欲下降，体重下降，稀便等症状，十分接近中医脾虚证的症状特点。本实验结果与其相一致，说明利血平方法制作的脾虚动物模型稳定性较好。实验结果表明，采用利血平方法制作的脾虚证RA动物模型，既有明显的脾虚症状，又有明显的RA特征，说明这种脾虚证RA病证结合模型，能够部份反映脾虚证RA病人的发病特点，具有可行性，利血平法制作的脾虚证CIA大鼠模型可以为RA脾虚证病证结合动物模型提供一个有益的参考。 本文中所论及的采用不同方法制作的脾虚证的RA病证结合动物模型，是结合现代研究成果，并在中医理论指导下而提出来的，肯定存在不足之处，要造出理想的中医病证结合动物模型，得到学界的公认，目前还有很大的难度。希望能本研究能对CIA病证结合动物模型的研究及中医治疗方法、治疗机理的深入探讨，起到抛砖引玉的作用。 参考文献 [1] 王 燕，赵宏艳，鞠大宏，于 峥，种 涛，王偲，董鑫鑫，刘梅洁．试论肾虚在痹证(类风湿性关节炎)发生发展中的作用．中国中医基础医学杂志，2009，15（12）：892-895． [2] 鞠大宏，赵宏艳，王燕，等．不同时间去势对大鼠CIA发病情况的影响．中国中医基础医学杂志，2010，16（8）：658-661． [3] 赵宏艳，王燕，肖诚，刘梅洁，吕诚，查青林，王偲，张继东，潘静华，王少君，滕静如，于峥，王伟，种涛，吕爱平，鞠大宏.不同品系、不同性别对大鼠CIA发病情况的比较研究.中国中医基础医学杂志，2010，16（9）：761-764. [4] 赵宁，贾红伟，张皖东，查青林，吴志鹏，吕爱平．利血平所致脾虚大鼠脾阳虚证和脾气虚证的证候属性．中医杂志，2008，49（5）：449-452． [5] Holmdahl R， Jansson L， Andersson M， et al. Immunogenetics of type II collagen autoimmunity and susceptibility to collagen arthritis . Immunology， 1988，65(2):305-310. [6] Al-Ghamdi MS. The Anti-inflammatory， Analgesic and Antipyretic Activity of Nigella sativa . J Ethnopharmacol， 2001， 76(1)， 45-48. [7] Schneider C， Matsumoto Y， Kohyama K， et al. Experimental autoimmune myositis in the lewis rat: lack of spontaneous T-cell apoptosis and therapeutic response to glucocorticosteroid application ， Journal of Neuroimmunology， 2000， 107(1) :83-87. [8] 肖诚，徐世杰，鞠大宏，等．从黏膜免疫探讨脾虚痹证(类风湿性关节炎)发生机理．中国中医药药信息杂志，2003，10（7）：1-2． [9] 徐世杰，肖 诚，周桂琴，吕爱平，王安民．实验性脾虚痹证的黏膜免疫学机制研究．中国中医基础医学杂志，2003，9（12）：915-918. [10] 张化彪．脾虚是痹证的发病之本．河南中医药学刊，1995，10(5)：58-60． [11] 北京师范大学生物系消化生理科研组．中医脾虚证动物模型的造型．中华医学杂志，1980，60：83-86． [12] 刘 汶，张敦义．番泻叶致脾虚证动物模型的造型方法．中国中西医结合脾胃杂志，1998；6（4）：231-232． [13] 陈小野， 邹世洁， 张智，易崇勤，王丽华，金敬善．大鼠长期脾虚造模的实验研究．中国中医基础医学杂志，1995，1（1）：37-41． [14] 黄炳山，毛翼楷，范隆昌．饮食失节所致的脾虚动物模型及中药治疗观察．中西医结合杂志，1983，3（5）：295-296． [15] 贾红伟，赵宁，张皖东，等．理中丸和四君子汤对利血平脾虚大鼠自主活动的影响．中国中医药信息杂志，2006，13（5）：34-35． [16] 赵宁，贾红伟，张皖东，等．理中丸对利血平所致脾虚大鼠血清中细胞因子的影响．中国中医基础医学杂志，2007，13（8）588-589． [17] 赵宁，张皖东，贾红伟，等．四君子汤对利血平所致脾虚大鼠肠道黏膜TGF-β和TNF-α表达的影响．中国中医基础医学杂志，2007，13（1）：44-46． 附图 附图1 正常对照组 大鼠踝关节 附图2 CIA对照组 大鼠踝关节 附图3 利血平CIA组 大鼠踝关节 附图4 正常对照组大鼠膝关节 HE染色，×50 附图5 CIA对照组大鼠膝关节 HE染色， ×50 附图6 利血平CIA组大鼠膝关节HE染色，×50 附图7 正常对照组大鼠回肠 HE染色， ×200 附图8 CIA对照组大鼠回肠 HE染色，×200 附图9 利血平CIA组大鼠回肠 HE染色，×200 |
回复此楼» 猜你喜欢
博士论文被抄袭
已经有25人回复
-
研二光催化6月底四篇二区什么水平
已经有7人回复
-
申博成果界定是根据Jcr分区还是中科院分区
已经有4人回复
-
博士白读了
已经有33人回复
-
颜宁:基础研究应顶天立地,立地即从需求端作为问题的出发点,立项背景就是面向真实需求
已经有10人回复
-
真的好想读博！
已经有6人回复
-
发现督导在听课，需要跟TA招呼示意吗？有同学看手机、课件有疏漏算大问题吗？
已经有10人回复
-
找工作过程中碰到好多人问南京某新换校长211的政策，规定如下
已经有16人回复
-
有偿收购废弃锂硫电池
已经有5人回复
-
国内科研环境差导致国内科研水平差的根源
已经有8人回复
fjtony163
版主 (文坛精英)
米米
- 翻译EPI: 386
- 应助: 361 (硕士)
- 贵宾: 6.875
- 金币: 69807.8
- 散金: 36050
- 红花: 222
- 沙发: 616
- 帖子: 21909
- 在线: 3791.1小时
- 虫号: 1397876
- 注册: 2011-09-11
- 专业: 遗传学研究新技术与方法
- 管辖: 论文翻译
2楼2012-04-17 11:21:29
10