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我是帅男

新虫 (正式写手)

[求助] 植物组织中的ROS如何定量测定?已有3人参与

用DCFH-DA如何定量测定,比如根中的ROS。要把ROS提取出来吗?求详细步骤
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
我是帅男(金币+4): ★★★很有帮助 ROS的那个综述很有用,谢谢 2012-03-09 21:01:21
DCFH-DA是一种用于测定活性氧的荧光探针。DCFH-DA进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内总体活性氧的水平。
目前有很多公司生产DCFH-DA活性氧检测试剂盒,楼主可以购买试剂盒,根据说明使用。
另外,我附上了一份网上找的试剂盒说明和一篇关于ROS的综述,供楼主参考

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  • 附件 1 : S0033活性氧检测试剂盒.pdf
  • 2012-03-08 23:46:07, 142.94 K
  • 附件 2 : ROS.pdf
  • 2012-03-08 23:46:42, 442.57 K
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2012-03-08 23:48:25
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vcvcvc

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
我是帅男(金币+1): 有帮助 的却是相对的,不过我要测组织的,不是细胞的。动物肝脏可以直接研磨,测定,但是植物没查到 2012-03-09 21:03:03
绝对定量很难,DCHF-DA是相对定量,染色后盯住一类细胞用confocal测荧光强度。
3楼2012-03-09 07:45:43
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索宇楠

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
我是帅男(金币+1): 有帮助 2012-03-09 21:06:02
可参照罗广华和王爱国(1990)的方法进行。
王爱国,罗广华.植物的超氧物自由基与经胺反应的定量关系[J].植物生理学通讯。
加油!
4楼2012-03-09 13:25:58
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fl378

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-03-08 23:48:25
DCFH-DA是一种用于测定活性氧的荧光探针。DCFH-DA进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内总体活性氧的水平。
目前有很 ...

背景值是怎么去除的?包括哪些背景?另外,单位怎么处理比较好呢?有人用H2O2当做标准单位,来衡量测试组产生ROS的多少
我最近在做H2DCFDA,这两处还是始终不敢确定,希望大家多探讨和交流。真心感谢!
5楼2012-06-11 04:30:49
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lpsdau

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

3楼说的没错,先看confocal,然后进行使用ImageJ测定比较荧光变化。
6楼2012-06-11 18:55:56
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e12j

新虫 (小有名气)

请教各位,DCFH-DA拿什么溶比较好,是不是很容易氧化啊?配制过程有什么要注意的地方啊?戴一般的医用口罩可以吗?
7楼2012-08-01 10:06:58
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寂寞月光冷

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般使用DCFH-DA染色后,计算荧光强度相对定量
8楼2014-09-19 11:11:26
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啥孤独

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-03-08 23:48:25
DCFH-DA是一种用于测定活性氧的荧光探针。DCFH-DA进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内总体活性氧的水平。
目前有很 ...

确实提到了荧光法测定ROS的方法,但还有其他的需要自己找
9楼2015-08-25 18:58:32
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Ava666

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好~最近也要做这个~请问你后来用了什么方法呢~🙏可否方便分享呢~邮箱wph4025@163.com

发自手机版WAP
10楼2018-10-12 23:39:34
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