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xan36

新虫 (小有名气)

[求助] 请问血清RNA怎样提取?又怎样验证已提取出血清RNA?已有7人参与

如题:请问血清RNA怎样提取?又怎样验证已提取出血清RNA?
谢谢!!
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风雨后的阳光更珍贵
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longrna

新虫 (正式写手)

你所检测的基因在哪里(例如外周血)含量高你就用那个来提RNA(同样的提取方法)作为阳性对照嘛。(仅作参考)
伟大航线....
11楼2011-11-21 08:47:40
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longrna

新虫 (正式写手)

有多大体积的血清?什么物种?提到后续实验做什么?要多少ng RNA?有什么特殊要求?
伟大航线....
2楼2011-11-17 16:12:26
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xan36

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-17 16:12:26:
有多大体积的血清?什么物种?提到后续实验做什么?要多少ng RNA?有什么特殊要求?

有1ml左右的血清,是正常人的,想验证下血清中有没有我所要的目的基因,想提出来后做个PCR,要求的话符合PCR扩增的要求就可
谢谢!
风雨后的阳光更珍贵
3楼2011-11-18 08:32:30
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longrna

新虫 (正式写手)

★ ★
wanhscn(金币+2): good!鼓励交流! 2011-11-19 18:31:46
人血液(全血,也就医学上说的外周血)中RNA的含量很低,1ml一般在3ug左右(1-7ug)。一般是处理抗凝血液。
像以上全血的RNA提取有两种思路:
1)直接处理抗凝的全血,即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法有个缺点:处理的体积血液体积有限,一般1ml Trizol处理100ul血液,最多不超过200ul.
2) 先去除血液中的红细胞分离出其中的白细胞(即淋巴细胞),然后提取白细胞的RNA。此方法的缺点:只能提取得到淋巴细胞的RNA,血液中游离的如病毒RNA无法提得。

你的血清是直接离心分离的吗?  如果只是做PCR,估计你直接弄200ul加Trizol提取就可以了。如果不行再从长计议。。。


血液是很复杂的。。。
伟大航线....
4楼2011-11-18 09:52:38
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