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1楼2011-11-17 15:43:53

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longrna

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wanhscn(金币+2): good!鼓励交流! 2011-11-19 18:31:46

人血液（全血，也就医学上说的外周血）中RNA的含量很低，1ml一般在3ug左右（1-7ug）。一般是处理抗凝血液。
像以上全血的RNA提取有两种思路：
1）直接处理抗凝的全血，即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法有个缺点：处理的体积血液体积有限，一般1ml Trizol处理100ul血液，最多不超过200ul.
2) 先去除血液中的红细胞分离出其中的白细胞（即淋巴细胞），然后提取白细胞的RNA。此方法的缺点：只能提取得到淋巴细胞的RNA，血液中游离的如病毒RNA无法提得。

你的血清是直接离心分离的吗? 如果只是做PCR，估计你直接弄200ul加Trizol提取就可以了。如果不行再从长计议。。。

血液是很复杂的。。。

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4楼2011-11-18 09:52:38

西湖鸟

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【答案】应助回帖

血清RNA含量低，可以用TRIZOL，过程有点麻烦，氯仿毒性较大，我们实验室目前用的是BIOG血清提取试剂，效果与TRIZOL差不多。

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18楼2018-12-03 23:18:25

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longrna

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有多大体积的血清？什么物种？提到后续实验做什么？要多少ng RNA？有什么特殊要求？

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2楼2011-11-17 16:12:26

xan36

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引用回帖:

2楼: Originally posted by longrna at 2011-11-17 16:12:26:
有多大体积的血清？什么物种？提到后续实验做什么？要多少ng RNA？有什么特殊要求？

有1ml左右的血清，是正常人的，想验证下血清中有没有我所要的目的基因，想提出来后做个PCR，要求的话符合PCR扩增的要求就可
谢谢！

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3楼2011-11-18 08:32:30

xan36

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4楼: Originally posted by longrna at 2011-11-18 09:52:38:
人血液（全血，也就医学上说的外周血）中RNA的含量很低，1ml一般在3ug左右（1-7ug）。一般是处理抗凝血液。
像以上全血的RNA提取有两种思路：
1）直接处理抗凝的全血，即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法 ...

谢谢您的回复！
我现在是想提出血清中的RNA，也就是外周血经过离心后的上清。
我现在想看下我的目的基因是否在血清中也存在，我用Trizol提取了血清中的RNA，但是不知道是否提出来，怎样检测已经提出血清中的RNA?比如用一种内参，但是好像b-actin不行，因为血清中没有b-actin

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5楼2011-11-18 10:01:36

facingworld

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xan36(金币+2): 谢谢回复 2011-11-19 08:36:45

引用回帖:

5楼: Originally posted by xan36 at 2011-11-18 10:01:36:
谢谢您的回复！
我现在是想提出血清中的RNA，也就是外周血经过离心后的上清。
我现在想看下我的目的基因是否在血清中也存在，我用Trizol提取了血清中的RNA，但是不知道是否提出来，怎样检测已经提出血清中的RN ...

我提过动物的血液的RNA，具体操作就不说了，你现在要检测你的RNA是否提出来了，最方便的办法是直接跑RNA电泳，或者直接测RNA浓度，看OD比值

不管用什么方式，我要我的生活每天变得越来越快乐！！

6楼2011-11-18 10:52:11

空谷幽风

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xan36(金币+2): 谢谢回复！ 2011-11-19 08:36:59

很多公司有RNA的提取试剂盒，可以从血清里面提出RNA，不过量不会太多。质量可以用nadodrop或者分光光度计来测，建议用 nanodrop

a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?

7楼2011-11-18 12:31:02

dragoner

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【答案】应助回帖

可以跑电泳啊，或者做real-time PCR

8楼2011-11-19 17:33:25

longrna

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wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-11-21 09:02:26

老实说，1ml的血清提RNA不好做。。。
产量估计不到1ug，全跑电泳估计勉强可以看得见吧....
不是很理解LZ所说的验证已提取RNA是指什么验证。是指此提取方法行不行得通还是说你怀疑自己的操作？
LZ提出RNA要怎么处置她啊？不妨就以那个来验证呗

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9楼2011-11-19 21:24:10

xan36

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9楼: Originally posted by longrna at 2011-11-19 21:24:10:
老实说，1ml的血清提RNA不好做。。。
产量估计不到1ug，全跑电泳估计勉强可以看得见吧....
不是很理解LZ所说的验证已提取RNA是指什么验证。是指此提取方法行不行得通还是说你怀疑自己的操作？
LZ提出RNA要怎么 ...

谢谢回复~
我是想验证下血清中有没有我所检测的目的基因。
因为血清中RNA含量肯定很微量，而且现在通过扩增的结果是阴性的，为了排除并不是血清中不存在我的基因而不是RNA根本没有提取出来，我想验证下RNA是否成功提取。

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10楼2011-11-20 09:36:34