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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有谁用过纯化糖蛋白的conA sepharose 4B琼脂糖凝胶柱的进！
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woaipan

铜虫 (初入文坛)

[求助] 有谁用过纯化糖蛋白的conA sepharose 4B琼脂糖凝胶柱的进！

最近从文献中看到conA sepharose 4B可以用来纯化糖蛋白，所以就想试试。
这是整个的过程
1、 装柱。
2、 平衡。
3、 吸附。
4、 清洗。
5、 洗脱。
平衡与洗脱的缓冲液用的相同的为20mmol/LTris-HCl缓冲液，pH7.4，其中含1mM MnCl2，1mM CaCl2，0.15M NaCl。但是很奇怪为什么我的蛋白过柱之后（中间我还让样品留在柱中反应了2小时）就立刻跟随杂蛋白一起被洗脱出来，不知道是什么情况。是不是我的平衡液出了什么问题，望解答！
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1楼2011-06-13 12:49:31
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woaipan

铜虫 (初入文坛)
自己顶一个
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2楼2011-06-13 16:19:31
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暖木warm

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

woaipan(金币+1): 2011-06-14 21:15:06
你的是植物糖蛋白吗？
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3楼2011-06-13 16:32:13
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woaipan

铜虫 (初入文坛)
不是，是动物组织体内的，有关吗
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4楼2011-06-13 21:37:54
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
silicare(金币+2): 鼓励新虫发帖交流 2011-06-15 17:48:50
woaipan(金币+2): 2011-06-16 08:38:10
你用的是离子交换柱吧，你那个蛋白的等电点是多少，这个和等电点关心很密切的。缓冲溶液的等电点高于样品的等电点上阴离子柱，缓冲液低于样品的等电点上阳离子。还有就是低盐上样，高盐洗脱，希望能帮到你
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5楼2011-06-14 21:25:59
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woaipan

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lihuan0525 at 2011-06-14 21:25:59:
你用的是离子交换柱吧，你那个蛋白的等电点是多少，这个和等电点关心很密切的。缓冲溶液的等电点高于样品的等电点上阴离子柱，缓冲液低于样品的等电点上阳离子。还有就是低盐上样，高盐洗脱，希望能帮到你

不是的，是亲和的柱子，与糖蛋白特异亲和
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6楼2011-06-16 08:39:08
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hshever

金虫 (正式写手)
同学，是这样的，这个柱子和高甘露糖型的糖蛋白结合是比较好的，但是和杂合型的糖蛋白就不咋的了，所以在使用这个柱子纯化糖蛋白时应该先知道你的蛋白带什么糖，因为糖蛋白几乎占据蛋白类50%，所以用这种方法纯化蛋白是不可取的，最好先用其他方法先除杂蛋白再用这根柱子
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呵呵
7楼2011-12-09 12:02:31
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xifang8231

木虫 (正式写手)
天天在小木虫上逛，今天终于找到亲人了，我也是用ConA琼脂糖凝胶4B 分离糖化血红蛋白的操作和LZ差不多，遇到的问题也是，糖蛋白在柱子中没有吸附，不知道LZ现在解决了吗？可否分享一下，或者有什么心得体会大家交流一下我的QQ328355285，望早日回复，期盼中.................
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8楼2011-12-09 12:26:58
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xifang8231

木虫 (正式写手)
一直等着lz的回复，可能是您太忙了都没时间吧
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9楼2011-12-12 13:56:45
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woaipan

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xifang8231 at 2011-12-12 13:56:45:
一直等着lz的回复，可能是您太忙了都没时间吧

抱歉，最近比较忙！可是更抱歉的是我到目前为止已经放弃了糖蛋白亲和层析，用了其它的亲和柱！你可以考虑用其它的试试！
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10楼2011-12-12 17:11:44
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