[交流] 【求助/交流】如何测胞内NADH、NAD、NADPH、NADP已有19人参与

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1楼2010-07-18 16:37:22

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Originally posted by liujian1987 at 2010-09-26 21:56:38:

我试过用酶循环法测，但精读不高啊，标曲只有一个九，能不能用呢？还有您说的内标，外标是什么意思啊？LC-MS太烦了吧，它的精确度怎样呢？

NADH/NADPH可以不用做标准曲线， extinction coefficient已知。但你无法分别出你测的是NADPH还是NADH。但NAD（P）吸光值做不出来。
LC-MS并不麻烦当你有标准样之后，测量方法我记得有paper说过，比较固定了。
分辨率上我知道Agilent的可以做的很好。

NADH/NADPH稳定性不是很好，所以你做的时候从样品裂解到测量前要快一些，而且低温较好

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8楼2010-09-26 23:16:39

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zhanghangjun

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用试剂盒。

2楼2010-07-18 16:47:01

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scelab(金币+1):谢谢交流 2010-07-18 20:47:38

用吸光度的变化来测定这些物质含量的变化，常采用的一般方法。

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3楼2010-07-18 20:00:19

lwiaanngg

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1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-07-18 23:55:18

包内的含量不容易测。LS说的用OD340是体外的测量方法，很难做细胞内的：
1 此法常用于胞外
2 你无法分析出NADH，NADPH的区别
3 细胞内在340nm下有吸收的物质太多了
要测包内的，可以用LC-MS。不同的细胞养好后，破碎取上清。用LC-MS测定。
RQ比较容易做，但绝对量你内标，外标都要的

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4楼2010-07-18 23:47:41

liujian1987

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Originally posted by lwiaanngg at 2010-07-18 23:47:41:
包内的含量不容易测。LS说的用OD340是体外的测量方法，很难做细胞内的：
1 此法常用于胞外
2 你无法分析出NADH，NADPH的区别
3 细胞内在340nm下有吸收的物质太多了
要测包内的，可以用LC-MS。不同的细胞养好后 ...

我试过用酶循环法测，但精读不高啊，标曲只有一个九，能不能用呢？还有您说的内标，外标是什么意思啊？LC-MS太烦了吧，它的精确度怎样呢？

5楼2010-09-26 21:56:38

liujian1987

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Originally posted by duanyongzhong at 2010-07-18 20:00:19:
用吸光度的变化来测定这些物质含量的变化，常采用的一般方法。

您说的是酶法吗？测一段时间内吸光度的增加值？

6楼2010-09-26 21:57:39

liujian1987

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Originally posted by zhanghangjun at 2010-07-18 16:47:01:
用试剂盒。

试剂盒要多少钱？

7楼2010-09-26 21:58:15

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小丹木木(金币+2): 多谢交流 2012-03-09 09:41:10

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8楼: Originally posted by lwiaanngg at 2010-09-26 23:16:39:
NADH/NADPH可以不用做标准曲线， extinction coefficient已知。但你无法分别出你测的是NADPH还是NADH。但NAD（P）吸光值做不出来。
LC-MS并不麻烦当你有标准样之后，测量方法我记得有paper说过，比较固定了。 ...

你做过辅酶的循环法测定吗就是MTT PES那一套
我NADH的一天就做好了但是NADPH的都快一周了始终没做好不但每次线性不好更关键的是重复性特别差同样的条件再做一次读数就和上次大为不同了而且经常出现某个值突然低下去了或者突然搞了起来而且有时某管突然就变黑了特别奇异不明白

戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。

9楼2012-03-08 21:25:38

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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。

10楼2012-03-08 21:25:47