应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜     石溪大学接受考研调剂申请>

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 怎么把四个目的片段用NEB无缝连接酶连接到一起啊
【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
31/1返回列表
查看: 292  |  回复: 2
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者嗒哒嗒哒将赠送您 10 个金币

嗒哒嗒哒

新虫 (初入文坛)

[求助] 怎么把四个目的片段用NEB无缝连接酶连接到一起啊

最近在做基因定点突变，想用同源重组的方法替换掉目的基因，设计了四个片段，左同源臂，抗性基因，目的片段，右同源臂，以下简称ABCD，我把这四段片段都扩了出来，但不能将四个片段用NEB酶连接起来，该怎么办啊？求大神指教啊

@starseacow 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2023-01-06 23:42:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
片段的摩尔比很重要

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2023-01-07 09:23:13
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嗒哒嗒哒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2023-01-07 09:23:13
片段的摩尔比很重要

怎么才算合适啊？我的A、B、D都是1000bp左右，C是2500bp，A、B的浓度是350ng/ul,C、D浓度是150ng/ul左右，A和B初次连接用两端的引物可以扩出来条带，但是把条带胶回收当模板扩，只有一条暗的条带，反而单独的A、B条带变亮了，C和D试了几次，都连不上

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2023-01-09 09:35:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 嗒哒嗒哒 的主题更新
31/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫 点击了解石墨炔、紫磷、mxene等新材料
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 事业单位还是大学好？ +3 青萍之沫 2024-04-16 4/200 2024-04-16 18:02 by zai81789
[教师之家] 北邮女博导并没有强制学生必须参与项目，说了学生可以不再参与项目 +38 苏东坡二世 2024-04-10 59/2950 2024-04-16 17:05 by dujianchao
[考博] 招在职生物与医药博士 +3 shin_shinli 2024-04-11 4/200 2024-04-16 16:24 by 1234mine
[考研] 求调剂 +4 鹿萌月yy 2024-04-15 5/250 2024-04-16 16:16 by chenweiwade
[有机交流] 傅克酰基化，产率大于百分之一百，求解，很急 90+4 hsn991013 2024-04-15 7/350 2024-04-16 11:36 by HF111001
[博后之家] 博后进站年龄可以超过35岁？ +6 suesong0818 2024-04-14 6/300 2024-04-15 15:34 by jiayi_su
[博后之家] 和合作导师关系不好怎么处理？ +7 dd921ww 2024-04-11 7/350 2024-04-15 09:19 by 周周520
[考研] 278求调剂 +4 月亮就蒜 2024-04-13 5/250 2024-04-14 23:03 by 永字号
[考研] 化学309找调剂，本科和一志愿双非，已过四六级 +28 gwj1 2024-04-10 30/1500 2024-04-14 22:57 by 永字号
[考研] 学硕328 机械 英一数一求调剂 +10 调剂求求328学 2024-04-10 14/700 2024-04-13 23:44 by 调剂求求328学
[考研] 331求调剂 +12 廖喆虓 2024-04-12 12/600 2024-04-13 17:10 by lincunhui
[考研] 求调剂 +3 y1234567890. 2024-04-12 4/200 2024-04-13 11:24 by y1234567890.
[考研] 0858能源动力求调剂 +5 毛驴子秋裤 2024-04-11 11/550 2024-04-12 11:41 by 想上岸啊a
[考研] 274分只求B区调剂 +4 备考的苏珊 2024-04-12 8/400 2024-04-12 11:36 by 备考的苏珊
[考研] 药学专硕300分求调剂 +3 饮水思源1 2024-04-10 4/200 2024-04-11 16:36 by yongzhesheng
[考研] 求给建议，感觉无望了 5+3 黎吧啦啊 2024-04-10 12/600 2024-04-11 14:09 by 橘子666789
[考研] 321求调剂 +3 龍Ryu 2024-04-11 3/150 2024-04-11 13:47 by 橘子666789
[考研] 调剂！！ +8 霜降~ 2024-04-09 8/400 2024-04-11 11:15 by houyaoxu
[考研] 273求调剂 +6 Shihouei 2024-04-10 6/300 2024-04-10 21:13 by a370226218
[考研] 化学调剂 +4 ZZHY99 2024-04-10 4/200 2024-04-10 17:38 by 简易玩家
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭