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simgen

金虫 (初入文坛)

[交流] 8分钟的柱纯化血液DNA提取来袭

一、实验材料
人全血(EDTA抗凝)、快速全血DNA小量试剂盒(Simgen Cat.No.3003050)、2×PCR Mix(Simgen Cat.No.7003100)、1.3 kb β-球蛋白引物(F:TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC/R:CCAGGATTTTTGATGGGACACG)
旋涡振荡器(越新仪器,XH-C)
台式离心机(eppendorf centrifuge 5415 D)
超微量分光光度计(Simgen Cat.No.sim100)
电泳仪(北京六一仪器厂,DYY-6C型)
PCR仪(Techne FPROG5Y Progene Thermal)

二、实验步骤
(一)DNA提取
1.在1.5 ml离心管中加入600 μl Buffer L7,再加入600 μl的全血(EDTA 抗凝),立即用力混合3~5次,使血样生成褐色沉淀物,再旋涡振荡30秒混合均匀,使沉淀物彻底分散开来。
2.13200 rpm离心1分钟。
3.将步骤2中的上清液全部倒入到核酸纯化柱(核酸纯化柱置于2 ml离心管中)中,盖上管盖,12000 rpm离心30秒。
4.弃2 ml离心管中的滤液,将核酸纯化柱置回到2 ml离心管中,在核酸纯化柱中加入800 μl Buffer WB,盖上管盖,12000 rpm离心30秒。
5.弃2 ml离心管中的滤液,将核酸纯化柱置回到2 ml离心管中,13200 rpm离心1分钟。
6.弃2 ml离心管,将核酸纯化柱置于一个洁净的1.5 ml离心管中,在纯化柱中加入100 μl Buffer TE,盖上管盖,室温静置1分钟,12000 rpm离心30秒得到全血DNA。
(二)PCR扩增
PCR扩增体系(图1)
扩增程序:
94℃,5 min,{94℃,45 sec;55℃,45 sec;72℃,1 min 30 sec}×30 cycles,72℃,10 min。

三、实验结果
1.在超微量分光光度计上用Buffer TE调零,测量提取的DNA,结果如下:(图2)
2.在1%的琼脂糖凝胶上加入5 μl提取的DNA/扩增产物进行电泳,结果如下:(图3)
四、分析与讨论
1.从操作步骤可以计算出实际标明的时间总共是5分钟,加上步骤衔接过程需要损耗的3分钟,8分钟完成血液DNA提取货真价实,确实没有夸张成分。好奇心强的小伙伴还可以扫描二维码观看真实的操作视频:(图4)

2.从浓度测量结果和图1电泳结果可知,用快速全血DNA小量试剂盒提取到的全血DNA纯度好,浓度高,条带清晰完整,无降解现象。
3.由图2可知,在40 μl扩增体系中用18 μl提取的DNA(过量模板测试)作为模板进行扩增,扩增结果与阳性对照一致,并无观察到明显的抑制效果,进一步说明用快速全血DNA小量试剂盒提取到的全血DNA纯度好,抑制物少,完全能满足后续实验需求。

所以,赶紧向我司及Simgen的经销商们申请免费的试用装,体验快速(8分钟)、大量(多至600 μl)提取到高纯度全血DNA的美好过程吧----Simgen快速全血DNA小量试剂盒,让实验变得更简单、更快捷。

8分钟的柱纯化血液DNA提取来袭
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8分钟的柱纯化血液DNA提取来袭-1
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8分钟的柱纯化血液DNA提取来袭-2
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