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739958571

铁虫 (初入文坛)

[求助] BSA封闭后，用pH=2的缓冲溶液清洗，会导致封闭失效吗？

在下做蛋白传感一类课题。比如在器件上修饰Anti-IgG去特异性检测IgG,用BSA进行的封闭防止非特异性结合。有几篇文献都有提到在一抗二抗特异性结合后，可以用pH=2的溶液清洗，可以使得Anti-IgG和IgG分离，这样可以重复测试，但是免疫蛋白和封闭用的BSA不会因为这样的清洗而变性失活吗？小弟非生物相关专业，望指教，多谢。
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1楼2022-07-05 14:03:23
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)
ph2的缓冲液，确实是可以把抗体洗掉的，条件需要摸。但是需要重新封闭。

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739958571
2楼2022-07-05 16:15:56
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739958571

铁虫 (初入文坛)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 爆炒小木虫 at 2022-07-05 16:15:56
ph2的缓冲液，确实是可以把抗体洗掉的，条件需要摸。但是需要重新封闭。

谢谢您的回复，还想请教您，我查到一抗二抗特异性结合靠的是静电引力、范德华力、氢键结合力和疏水作用力。在较大或较小的pH条件下会破坏两者间静电力，降低了结合力，进而发生解离。这个不确定是否正确，想请教一下。而且还有是为什么BSA在pH=2的环境下会失活需要重新封闭，而抗体蛋白就不会失活呢？
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3楼2022-07-06 13:17:48
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 739958571 at 2022-07-06 13:17:48
谢谢您的回复，还想请教您，我查到一抗二抗特异性结合靠的是静电引力、范德华力、氢键结合力和疏水作用力。在较大或较小的pH条件下会破坏两者间静电力，降低了结合力，进而发生解离。这个不确定是否正确，想请教一 ...

纯生物角度，一般没人考虑那么多作用力，只要species对上就好了。生物物理这款，你测个ITC，看一下结合的亲和咋样。

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4楼2022-07-06 15:56:05
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