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TA克隆质粒测序
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| 最近在做TA克隆，想把EGFP片段连接在克隆载体上，载体选的是takara的T-Vector pMD19 (Simple)，酶是taq酶，连接转化后挑白色阳性菌落扩增，菌液分别用m13通用引物和目的片段引物pcr都能得到目的片段，但菌液和通用引物pcr产物分别送公司测序后结果与EGFP和T载体完全比对不上。测序结果ncbi上blast后发现是其他克隆载体的新霉素抗性基因，但挑了蓝色阴性菌落提质粒送测序结果和T载体能比对上，说明载体没问题，EGFP片段连接之前测序也是没问题那是哪里出了问题呢？做了两次，测序结果都是一样的，现在怀疑是感受态细胞的问题，想问问各位虫友的意见。 |
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