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一段序列分成三段扩增，直接用第一段的F和第三段的R扩增，得到的条带不一样。
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| 我想要克隆一个病毒里的一段序列，因为比较长，所以分成了三段设计引物，分别是123段的F和R，其中因为后面要同源重组进行连接，所以1R和2F还有2R与3F是互补的，但是1和3两段序列都已经扩增出来连上pMD19T了，2片段一直扩增不出来，用的是taq酶，之后就想要不用高保真直接扩增这一整段4000bp的序列，就直接用1F和3R两个引物直接扩增。但结果是扩增出来了，也用pEASY连上了，但是测序结果出来不是我要的目的片段的序列，是一个叫食酸戴尔福特菌的菌株序列，但是条带大小是我的目的片段的大小啊，这是没连上还是我PCR扩增出来的就不是我的片段呀，有没有大神帮帮忙。 |
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