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ZSder

新虫 (初入文坛)

[求助] 你好,我蛋白透析的时候,透析袋是截留量8~14kDa的,但是...

你好,我蛋白透析的时候,透析袋是截留量8~14kDa的,但是透析完跑电泳大分子蛋白却没了,小分子蛋白却还在,(期间更换透析液的时候,第一次跟最后一次,透析液都变浑浊了)。请问是我透析夹没夹紧的原因吗?我透析袋是两头都浸没在透析液里的,还是另外的原因?

然后我蛋白提纯做ATKA纯化的时候,目标条带35kDA,还是有30跟25kDa杂带,能不能通过什么方法解决?

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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

大蛋白在透析过程中沉淀了吧。
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2021-09-26 11:06:19
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一个不小心就

金虫 (正式写手)

这显然是沉淀了呀,你把沉淀也跑个胶就知道了。
去除杂蛋白需要试不同方法,不试谁也不知道那种方法好。一些方法供你参考:
1,裂菌后上清用硫酸铵沉淀。如果你目的蛋白表达量很高,那应该比较容易被沉淀下来,合适的硫酸铵用量下能起一个初纯化的作用。
2,阴离子,阳离子,疏水层析都可以试。
3,等电点沉淀也可以用来纯化。
4,以上不能保证成功。有些蛋白就是难搞。
5,透析发生蛋白沉淀,说明你的透析液不太理想。加DTT了吗?
3楼2021-09-27 15:28:23
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