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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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小丸子8

新虫 (初入文坛)

[求助] 自下而上法LC-ESI-MS/MS检测靶蛋白,纯蛋白可检测出,血清中检测不出是什么原因?已有2人参与

变性,还原、烷基化、加入内标肽,酶解后,固相萃取,干燥复溶,最后LC-ESI-MS/MS检测特征肽和内标肽,碰撞能和流动相都优化后,纯蛋白响应值很高。
之后开始做血清标本,比处理蛋白多了一步去除高丰度蛋白步骤,也是严格按照试剂盒步骤做的,然而检测响应值只有500~1000。
血清中是有目标蛋白的,因为在自动生化分析仪上面检测到靶蛋白浓度大约有20ug/ml。
求问各位大佬血清中检测不出是什么原因,万分感谢!
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S8032

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
lost somewhere, or enrichment not enough
2楼2021-07-14 12:04:36
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S8032

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

spiking your 纯蛋白 into 血清, see what level you can detect
3楼2021-07-14 12:07:42
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小丸子8

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by S8032 at 2021-07-14 12:07:42
spiking your 纯蛋白 into 血清, see what level you can detect

非常谢谢你,我试试看

发自小木虫Android客户端
4楼2021-07-15 16:18:16
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sfeihua

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
去除高丰度蛋白步骤,会不会也同时去除目标蛋白?如果不去除,对分析结果有什么影响?可做加标回收确认

发自小木虫Android客户端
5楼2021-07-16 07:13:07
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小丸子8

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sfeihua at 2021-07-16 07:13:07
去除高丰度蛋白步骤,会不会也同时去除目标蛋白?如果不去除,对分析结果有什么影响?可做加标回收确认

感谢您的指导!去除高丰度是购买的去除白蛋白和IgG的试剂盒。不去除的话血清中的高丰度蛋白会影响低丰度靶蛋白离子化的效果。可以请问下您说的加标回收,是需要合成带有标记(如同位素内标)的靶蛋白吗
6楼2021-07-17 10:17:56
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小丸子8

新虫 (初入文坛)

PS:质谱仪是AB SCIEX 5500QTRAP,以前师姐用上述的方法是可以在仪器上做出10000多的响应值,是不是说明方法建立这块没什么大问题。目前仪器坏了,借用了别处的仪器,型号和厂家也是相同的,响应值却很低,不清楚是什么原因
7楼2021-07-17 10:30:25
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