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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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winnerwfy

新虫 (初入文坛)

[求助] 枯草芽孢杆菌整合型质粒电转化效率已有3人参与

请问有做过枯草芽孢杆菌整合型质粒pAX01和pDG1730的电转化的吗？同样的过程，电转化加入300ng质粒，游离型质粒能长上百个，整合型的却一个不长，是不是需要更多的质粒，这样的结果表明转化效率低还是整合效率极低？
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1楼2021-05-17 18:48:45
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mengyouren

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

游离质粒转化没问题，整合质粒可考虑是否做了线性化后再转化，转化效率和整合效率可能都会提高
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2楼2021-07-14 11:41:17
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ggdy3478

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

兄弟你好，我们也在做这个整合实验，发现能长单克隆，但发酵没有产物，请问你的枯草芽孢杆菌能否借一份给我们试试，我们的和你们的一起转化，转化子再给你们寄过去。非常谢谢。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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青椒一个
3楼2021-07-15 05:54:50
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dskfhe123

新虫 (初入文坛)
最近也在做枯草芽孢杆菌的电转实验，但做了很久只成功过一两次，目前遇到以下问题：
1、电击时间常数达不到4ms，使用的是biorad的micropulser，应该用哪个程序会比较好？我目前使用Agr的预设程序，2.2kv，0.1cm电击杯
2、电转后挑的菌摇不起来，很清澈，或者是需要摇很久才浑浊，是电转的质粒影响菌的生长还是电转复苏的问题？我用的是RM培养基（加了海藻糖），100rpm，37度复苏

请大家帮帮忙~~
在课题组只有我一人做枯草芽孢杆菌，能请教的人实在不多

发自小木虫IOS客户端
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4楼2021-10-10 13:45:18
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yyyycc2021

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问楼主成功了吗，我们也是这个整合型质粒，自然转化效率比较高，可以考虑换一个方法
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5楼2022-07-28 18:05:43
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yyyycc2021

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dskfhe123 at 2021-10-10 13:45:18
最近也在做枯草芽孢杆菌的电转实验，但做了很久只成功过一两次，目前遇到以下问题：
1、电击时间常数达不到4ms，使用的是biorad的micropulser，应该用哪个程序会比较好？我目前使用Agr的预设程序，2.2kv，0.1cm电击 ...

您好 请问您现在转化成功了吗，用的质粒和菌株是什么呢？
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6楼2022-07-28 18:09:58
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