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【调剂】北京石油化工学院2024年16个专业接受调剂
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卷卷康小西

银虫 (小有名气)

[求助] pET32a纯化有很多杂蛋白,要怎么改进呢已有3人参与

楼主用pET32a表达酶,但是镍柱纯化发现有很多杂蛋白,尝试了不同梯度的洗脱都没有改进。
会不会是pET32a载体的结构有影响?his tag是在trx tag 后面的,这样会影响纯化效果吗?
有大佬可以解答下吗???
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danding~hr

新虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
卷卷康小西(fuyuandj86代发): 金币+10 2021-04-12 11:55:23
可以尝试下离子交换

发自小木虫Android客户端
2楼2021-04-03 23:16:48
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
卷卷康小西(fuyuandj86代发): 金币+10 2021-04-12 11:55:33
镍柱纯化效果一般不太好。要想效果好,可以在另外一端加一个strep tag II。双标签纯化。

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生物资源交流QQ群:1044518333
3楼2021-04-04 06:57:59
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卷卷康小西

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-04-04 06:57:59
镍柱纯化效果一般不太好。要想效果好,可以在另外一端加一个strep tag II。双标签纯化。

我后面还用MBP融合表达目的基因,是不是也可以再利用MBP再纯一遍?
4楼2021-04-04 09:52:48
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
卷卷康小西(fuyuandj86代发): 金币+10 2021-04-12 11:55:44
引用回帖:
4楼: Originally posted by 卷卷康小西 at 2021-04-04 09:52:48
我后面还用MBP融合表达目的基因,是不是也可以再利用MBP再纯一遍?...

可以的。MBP纯化效果非常好。纯度很高。竟然有MBP标签,其实你没必要用Ni纯化了。
生物资源交流QQ群:1044518333
5楼2021-04-04 10:43:14
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卷卷康小西

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by snoopyzxx at 2021-04-04 10:43:14
可以的。MBP纯化效果非常好。纯度很高。竟然有MBP标签,其实你没必要用Ni纯化了。...

嗯嗯,感谢指点!
6楼2021-04-08 15:50:03
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dppdpp

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我也是用32a表达蛋白能加微信吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2021-04-22 19:56:43
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by dppdpp at 2021-04-22 19:56:43
我也是用32a表达蛋白能加微信吗

我有一个改造过的pET32a载体,可以大幅减少非特异条带。

发自小木虫Android客户端
生物资源交流QQ群:1044518333
8楼2021-04-23 07:10:54
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sanlang_qq

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

平衡液中加入适量咪唑(50mM内)试试
金鳞岂是池中物,一遇风云便化龙
9楼2021-05-27 16:48:31
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家


【答案】应助回帖

纯化方法那么多,可以试试别的。我们可以提供工艺开发
10楼2021-06-12 15:53:24
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