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ChemBeanGo

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[交流] 大极性组分的制备救星—亲水作用色谱HILIC

目前对大极性化合物的研究在医药、天然产物、生化、食品安全等方面的应用逐渐提升,对大极性化合物的纯化需求也越来越多。然而在色谱纯化中,最常用的反相模式对大极性组分的纯化有自己的短板——保留太弱,而亲水作用色谱(HILIC)则弥补了反相色谱的缺点,它可提高对极性物质的保留从而获得满意的纯化效果。

HILIC的应用模式与正相色谱很相似,其保留强度与溶质极性成正比,与流动相极性成反比。其保留机制是液-液分配、吸附作用、离子交换等多种作用组合,从而使HILIC与反相相比有独特的选择性。HILIC固定相是极性组分,可吸附极性溶剂和水相使固定相表面形成极性亲水层,基于相似相容的原理,则极性样品会与固定相相互作用,从而增加保留,所以流动相至少要含有3%的极性溶剂,这样才能在固定相表面形成亲水层。

HILIC条件下,常用的流动相体系是乙腈和水,水作为强溶剂,乙腈作为弱溶剂,某些情况下如果水相洗脱能量太强,可用极性有机溶剂代替部分水相可增加保留时间,但不可用甲醇、乙醇等极性醇类完全替换乙腈,否则会导致保留时间不充分。常用的固定相有未衍生化硅胶或杂化颗粒、酰胺基、氨基、二醇、两性离子等,其中未衍生化的硅胶应用比较广泛,尤其是应用于药物分析和纯化方面。

氨基柱是由极性基团氨丙硅烷基键合在硅胶上制成的极性键合相色谱柱,一般用于分离极性较大的组分。氨基柱一般可以正相使用,也可反相使用,但是氨基柱稳定性较差,反相模式下含水量也不能太高否则键合相易水解,当有机相比例大于70%时后就是在HILIC模式下应用,此时固定相对样品的保留值与选择性都与反相模式大不相同。氨丙基固定相带正电,阴离子物质在低到中pH的条件下可通过离子交换或分配作用而加强保留。研究人员在应用氨基柱在HILIC模式下纯化样品时,可以参考上述经验。
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Howie.Wang

新虫 (初入文坛)



ChemBeanGo(金币+1): 谢谢参与
还有一种方式就是在C18或者C8链中间嵌入一个极性基团,用以增加对极性化合物的保留;HILIC虽然可以用于正相,但大极性的化合物一般水溶性比较好,有机溶剂溶解度低,同样面临着保留不好的问题。可以交流。
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11楼2021-01-14 11:29:32
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penn92

新虫 (初入文坛)



ChemBeanGo(金币+1): 谢谢参与
您好!Hilic色谱用于制备的话,通常可以分离多大量的样品呢?
目前本实验室拥有25mm、30mm、40mm、50mm内径的色谱柱,随着样品越来越复杂,反相分离已经无法满足分离要求了。
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12楼2021-01-19 20:21:07
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兰迪美晨

铁虫 (小有名气)



ChemBeanGo(金币+1): 谢谢参与
氨基柱耐纯水吗?是否可以通过使用纯水来清洗色谱柱

发自手机版WAP
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13楼2021-01-23 15:26:54
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tzynew2楼
2020-12-30 14:51   回复  
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8 发自小木虫Android客户端
2020-12-30 16:40   回复  
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2020-12-30 17:49   回复  
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zszly5楼
2020-12-30 18:17   回复  
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halomilu6楼
2020-12-31 13:23   回复  
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psylhh7楼
2021-01-02 23:11   回复  
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