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yuanyuanwen铜虫 (小有名气)
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[求助]
如何提取胞内cAMP？！！求求各位大神帮帮我已有1人参与
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 是这样子的，楼主目前在做一个药物的测活，给药刺激细胞后，检测细胞产生的cAMP,用的是RD公司的试剂盒，这个试剂盒有一个步骤就是在检测前需要提取细胞内的cAMP,但是根据试剂盒说明书上写得，用预冷的PBS洗涤细胞三次后，重悬细胞至试剂盒所提供的细胞裂解液中，反复冻融细胞使得裂解全完，再离心去除细胞碎片，提取上清液进行检测。但是楼主做了一次后，发现在加入裂解液至细胞板中，直接放入-20度，冻融一次，吸取裂解液台盼蓝染色后未能发现有细胞碎片。怀疑是裂解液加过量引起细胞全部裂解了，然后吸取裂解离心后直接取上清进行检测。结果是给药刺激组与空白组的OD值一样。 所以想问各位，我是否是根本没有裂解细胞？由于cAMP保护剂是在药液中，在裂解前是经过洗涤了，是否因为保护剂洗掉之后，样品中所含的cAMP降解导致未能检测出cAMP的含量。或者大家有没有更好的提取胞内cAMP的方法分享给楼主，感激不尽！！！ |
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2楼2020-11-21 13:20:17
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4楼2020-11-21 14:48:45
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