应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜     意得辑论文润色翻译送200元JD卡

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 如何提取胞内cAMP？！！求求各位大神帮帮我
51/1返回列表
查看: 200  |  回复: 4
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yuanyuanwen

铜虫 (小有名气)

[求助] 如何提取胞内cAMP？！！求求各位大神帮帮我已有1人参与

        是这样子的，楼主目前在做一个药物的测活，给药刺激细胞后，检测细胞产生的cAMP,用的是RD公司的试剂盒，这个试剂盒有一个步骤就是在检测前需要提取细胞内的cAMP,但是根据试剂盒说明书上写得，用预冷的PBS洗涤细胞三次后，重悬细胞至试剂盒所提供的细胞裂解液中，反复冻融细胞使得裂解全完，再离心去除细胞碎片，提取上清液进行检测。
        但是楼主做了一次后，发现在加入裂解液至细胞板中，直接放入-20度，冻融一次，吸取裂解液台盼蓝染色后未能发现有细胞碎片。怀疑是裂解液加过量引起细胞全部裂解了，然后吸取裂解离心后直接取上清进行检测。结果是给药刺激组与空白组的OD值一样。
         所以想问各位，我是否是根本没有裂解细胞？由于cAMP保护剂是在药液中，在裂解前是经过洗涤了，是否因为保护剂洗掉之后，样品中所含的cAMP降解导致未能检测出cAMP的含量。或者大家有没有更好的提取胞内cAMP的方法分享给楼主，感激不尽！！！
回复此楼
/////');">

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
星辰陨落无所降，让我搭个顺风车，越过夕阳。
1楼2020-11-21 12:33:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

实习版主 (正式写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yuanyuanwen: 金币+30 2020-11-26 12:51:30
细胞内小分子提取一般用的是强酸或强碱裂解细胞，然后再中和。这样可以除去细胞内的大部分蛋白质和核酸，减少干扰。即便用冻融裂解细胞的方法，往往也都包括一步加热失活的步骤。建议楼主一字一句地仔细阅读试剂盒说明书。
赞一下 回复此楼
/////');">
业精于勤，荒于嬉；行成于思， 毁于随
2楼2020-11-21 13:20:17
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanyuanwen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2020-11-21 13:20:17
细胞内小分子提取一般用的是强酸或强碱裂解细胞，然后再中和。这样可以除去细胞内的大部分蛋白质和核酸，减少干扰。即便用冻融裂解细胞的方法，往往也都包括一步加热失活的步骤。建议楼主一字一句地仔细阅读试剂盒说 ...

您好，我想请问如果我直接加入裂解液至细胞板中，冷冻后再加热使溶解，是否能裂解细胞？
赞一下 回复此楼
/////');">
星辰陨落无所降，让我搭个顺风车，越过夕阳。
3楼2020-11-21 13:54:59
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

实习版主 (正式写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuanyuanwen at 2020-11-21 13:54:59
您好，我想请问如果我直接加入裂解液至细胞板中，冷冻后再加热使溶解，是否能裂解细胞？...

快速冻融可以裂解细胞，但裂解能力较差。很多裂解液里有TritonX-100等洗涤剂，可以破坏细胞膜，因此能大大提高裂解能力。
如果担心Triton X-100会影响后续实验，可以重复三次玻璃砂震荡配合液氮快速冻融，用物理方法裂解细胞。
赞一下 回复此楼
/////');">
业精于勤，荒于嬉；行成于思， 毁于随
4楼2020-11-21 14:48:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanyuanwen

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2020-11-21 14:48:45
快速冻融可以裂解细胞，但裂解能力较差。很多裂解液里有TritonX-100等洗涤剂，可以破坏细胞膜，因此能大大提高裂解能力。
如果担心Triton X-100会影响后续实验，可以重复三次玻璃砂震荡配合液氮快速冻融，用物理方 ...

好的 谢谢您

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
/////');">
星辰陨落无所降，让我搭个顺风车，越过夕阳。
5楼2020-11-21 16:46:13
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuanyuanwen 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 双非学姐获4个调剂复试？经验可复制，你也可以！
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 征学霸/学友一枚 +16 小葵吖 2021-01-24 19/950 2021-01-28 05:36 by 王飞飞走起
[论文投稿] 这里的都看不上国内科技核心，中文核心甚至c刊吗？ +17 xuejiu_ 2021-01-23 18/900 2021-01-27 23:21 by ybsyh3
[论文投稿] 《化学进展》引用PNAS如何获得图片版权 10+4 hlbt2007 2021-01-23 6/300 2021-01-27 23:14 by ybsyh3
[教师之家] 关于河海大学人才引进职称特评 +11 mlaa2402 2021-01-24 20/1000 2021-01-27 20:10 by 大名有机
[教师之家] 周末加班 (金币+15) +12 flasheagle 2021-01-23 14/700 2021-01-27 19:48 by 愤怒的稀土
[基金申请] 国际期刊预警已出，现在面上基金代表作里还能列IEEE Access么？ +6 yzb85 2021-01-25 14/700 2021-01-27 18:14 by donaldtx
[论文投稿] 投稿已经修回,导师要求撤回稿件怎么办 +10 RickyZhen1 2021-01-23 10/500 2021-01-27 18:00 by holypower
[文学芳草园] 劝君不要闲下来，闲极生悲 +8 树知jy 2021-01-23 9/450 2021-01-27 17:46 by sumbreeze1
[药学] 冻干粉一定是针剂吗？如果是问了提高溶液的稳定性，制备成冻干粉可以吗？ +3 yongxiu2008 2021-01-22 4/200 2021-01-27 14:33 by Tonyyi
[论文投稿] 一个加我微信的中介发的，这也太离谱了吧 +9 xuejiu_ 2021-01-26 12/600 2021-01-27 13:18 by marineman
[论文投稿] OE大修，不知道中的概率大不大。。 +3 mosuu 2021-01-27 4/200 2021-01-27 10:03 by mosuu
[硕博家园] “糖斐红,脂三黄,蛋双紫” +4 johnhoward 2021-01-23 7/350 2021-01-27 00:13 by szwhust108
[考研] 。 +9 1526469 2021-01-22 24/1200 2021-01-26 21:35 by ykdssyx98
[论文投稿] 安全与环境工程投稿 +3 malilili 2021-01-22 12/600 2021-01-25 21:25 by malilili
[电化学] 装配锂电池时，电解液的量会影响电压吗？ +4 MJtongshao 2021-01-22 6/300 2021-01-25 19:55 by MJtongshao
[教师之家] 请教首聘期考核 +9 mlaa2402 2021-01-25 17/850 2021-01-25 19:50 by dvcb9316
[论文投稿] 如何快速找到目标期刊 +5 多浩 2021-01-21 6/300 2021-01-24 18:28 by 00000SKL
[博后之家] 想申请广州那边的博后 +4 skymolin 2021-01-21 8/400 2021-01-24 15:57 by 尘落小窝
[第一性原理] 做第一性原理的公司，付费。有没有联系方式和主页 +3 hopedream 2021-01-21 3/150 2021-01-22 15:23 by 言榭竹昔
[基金申请] 紧急国自然标书模板求助（2021年） +3 guoxi_7_7 2021-01-21 4/200 2021-01-21 18:05 by 天天向上3035
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭